RESÚMENES DE LAS COMUNICACIONES - Medicina (Buenos Aires)

88
MEDICINA - Volumen 64 - (Supl. II), 2004
cionales. Sin embargo, si son fusionados sus cDNA en un vector,
esta unión resulta también en una enzima activa y por lo tanto
en la expresión de genes. Nuestra hipótesis es que insertando
una secuencia de ADN entre ambos fragmentos, la presencia de
un codón «stop» en esta, daría un solo fragmento no funcional;
y en caso de ocurrir un evento de re-iniciación río abajo del codón
«stop», se obtendrían dos fragmentos, pero separados y por lo
tanto tampoco funcionales. Al transformar bacterias carentes de
esta enzima, se podría medir la presencia de un codón stop en
la secuencia insertada por la expresión del gen reportero ß-Gal.
Nuestro objetivo fue diseñar y desarrollar este plásmido
recombinante, y confirmar su reconstitución funcional a través de
la observación de distintos fenotipos del reportero ß-Gal. Para
esto se insertó uno de los fragmentos del gen de la enzima (se
evita mencionar la enzima por posible patentamiento del método),
en marco de lectura y separado por un MCS, dentro del
plásmido que contenía el otro fragmento de la enzima, y posteriormente
se transformaron bacterias carentes de esta enzima
endógena. Se obtuvieron colonias de color azul (en presencia de
X-Gal) en las bacterias transformadas, mientras que las células
control (sin transformar) fueron de color blanco. Concluimos que
el plásmido diseñado es funcional y revierte el fenotipo de las
bacterias, y de esta manera se plantea su posible uso como herramienta
para diagnóstico de mutaciones truncantes.
40. (7771) VARIACIÓN Y MUTACIÓN DE MARCADORES
MICROSATÉLITES DE CROMOSOMA Y EN UNA MUES-
TRA CAUCASOIDE. CATANESI, CECILIA INéS; DI
ROCCO, FLORENCIA; SILBESTRO, MIRIAM; VIDAL
RIOJA, LIDIA
Lab. de Genética Molecular - IMBICE. Área temática secundaria:
Otros: Genética de poblaciones humanas
Los microsatélites ubicados en la región no recombinante del
cromosoma Y (Y-STRs) son de herencia exclusivamente paterna
y se transmiten en bloque a través de un linaje masculino.
Son de utilidad para estudios de paternidad e identificación de
material genético masculino en muestras forenses mezcladas con
material femenino. Sin embargo, para la correcta resolución de
casos es importante conocer las frecuencias haplotípicas regionales
y la tasa mutacional de los Y-STRs. El presente es un
aporte a dicho conocimiento en varones caucasoides de Argentina.
Los microsatélites DYS19, DYS389I, DYS389II, DYS390,
DYS391, DYS392, DYS393, DYS385a/b, DYS437 y DYS438 fueron
tipificados por PCR y electroforesis en geles de poliacrilamida
en individuos pertenecientes a 35 familias. Para el análisis de la
tasa mutacional de estos Y-STRs se analizaron 500 eventos
meióticos en duplas padre-hijo, de vínculo biológico comprobado
(edad paterna promedio=32,94). Se hallaron 34 haplotipos
diferentes, siendo el más frecuente (p=0,05714 ±0,040): DYS19-
14; DYS389I-13; DYS389II-29; DYS390-24; DYS391-10; DYS392-
13; DYS393-13; DYS385-11/14; DYS437-15; DYS438-12. La diversidad
génica fue de 0,6273 ±0,3426. Se detectaron dos mutaciones
(una en DYS391 y una en DYS385). El conjunto de
marcadores DYS19, DYS389I, DYS389II, DYS390, DYS391,
DYS392, DYS393 y DYS385a/b es llamado comúnmente
«haplotipo mínimo». Datos previos de tasa mutacional (µ) de
estos marcadores indicaron un total de 18 mutaciones en 8659
eventos meióticos, los cuales sumados al presente resultado indicarían
un valor de µ=0,0020. Hasta el momento no existen
estimaciones de µ para los Y-STRs DYS437 y DYS438, siendo
necesario el análisis de un mayor número de eventos meióticos.
Estos datos preliminares son de utilidad para obtener un valor
de µ fidedigno. Esto redundará en una mejor estimación de probabilidades
en casos de paternidad que presenten mutaciones.
41. (7926) AUSENCIA DE INESTABILIDAD DE MICROSA-
TÉLITES EN SINDROMES MIELODISPLÁSICOS. VÁZ-
QUEZ, MARIA LORENA (1,2); DE DIOS SOLER, MARCELA
(1); TACCHI, CECILIA (2); VENICA, ANDREA (2);
ALBERBIDE, JORGE (2); NUCIFORA, ELSA (2); LARRIPA,
IRENE (1); FUNDIA, ARIELA (1)
Depto. de Genética, Academia Nacional de Medicina; Lab.
Central, Hospital Italiano. (1) Academia Nacional de Medicina;
(2) Hospital Italiano
El desarrollo de los síndromes mielodisplásicos (SMD) es un
proceso gradual en múltiples etapas que llevan a la expansión
leucémica del clon maligno. En la fase inicial habría lesiones
iniciadoras citogeneticamente indetectables originando inestabilidad
genómica que induciría cambios cromosómicos críticos. A
fin de establecer si las SMD presentan inestabilidad de microsatélites
(MSI) se estudiaron 10 pacientes al diagnóstico o tratados
con ácido fólico, vitamina B12 o eritropoyetina. Para evaluar
la MSI en las células malignas respecto de las células normales,
se separaron las células mononucleares de médula ósea
por Ficoll-Hypaque y se incubaron 1 hora a 37°C obteniéndose
las células no adheridas enriquecidas en stem cell CD34+. Se
extrajo ADN de las células no adheridas (ADN tumoral) y de
polimorfonucleares (ADN normal) con fenol/cloroformo y precipitación
con etanol. Se seleccionaron 3 microsatélites: BAT 25, BAT
26 y D18S58 recomendados como panel de referencia de MSI.
La amplificación se efectuó por PCR touchdown con disminución
de la temperatura de annealing de 65 a 55°C en 25µl con 1,0mM
Cl2Mg, 100µM dNTPs, 0,4-0,8µM primers, 1U de Taq polimerasa
y 200ng de ADN. Los productos se separaron por electroforesis
en geles de poliacrilamida no desnaturalizantes teñidos con nitrato
de plata (0,1%). El tamaño de los alelos observados para
BAT 25 y 26 mostró una variación alélica de –2 a +1 pb en los
pacientes estudiados, no observándose diferencias entre tejido
normal y tumoral. Con el microsatélite D18S58, un caso presentó
una amplificación de un alelo en el ADN de las células no
adheridas respecto del alelo constitutivo observado en el ADN
normal. Estos resultados demuestran que ninguno de los pacientes
con SMD presenta alteraciones en los microsatélites analizados,
sugiriendo que la MSI no tendría un rol importante en la
patogénesis de los SMD.
42. (7958) ASOCIACIÓN DE LOS POLIMORFISMOS DE
MTHFR CON TOXICIDAD AL METOTREXATO (MTX) EN
PACIENTES PEDIÁTRICOS CON LEUCEMIA LINFOBLÁS-
TICA AGUDA (LLA). ESTUDIO PRELIMINAR. ARÁOZ,
VERÓNICA (1); FELICE, MARÍA (2); D´ALOI, KARINA (2);
ALFARO, ELIZABETH (2); CHERTKOFF, LILIEN (1)
(1) Biología Molecular-Genética. Hospital Garrahan. (2)
Servicio de Hemato-oncología. Hospital Garrahan
La enzima metilentetrahidrofolato reductasa (MTHFR) cumple
un rol esencial en el metabolismo del folato. Diferencias en su
actividad debido a variantes genéticas como C677T y A1298C
pueden modular la respuesta a agentes quimioterápicos
antifolato. De ellos, el MTX es el más usado en el tratamiento
de LLA. El objetivo de este estudio es evaluar si existe asociación
entre la presencia de los polimorfismos C677T o A1298C y
la toxicidad en niños con LLA que reciben altas dosis de MTX.
Se estudiaron 101 pacientes con LLA sometidos a esquemas de
tratamiento que incluyen 4 ciclos de 2 ó 5 gr/m2/día de MTX. Se
analizó un total de 247 ciclos en los 65 niños que completaron
el tratamiento con MTX. Se evaluó toxicidad hematológica, renal,
hepática, gastrointestinal, de mucosa, infecciosa, cardíaca
y neurológica. La toxicidad se definió en 5 grados según OMS.
Considerando la dosis de MTX los pacientes se estratificaron en
dos grupos: A) 2gr y B) 5gr. La búsqueda de las variantes C677T
y A1298C se realizó por PCR y posterior corte con enzimas de
restricción. La asociación entre genotipos y toxicidad se analizó
con tablas de contingencia y test de Fisher. En los niños con LLA
la frecuencia genotípica encontrada fue: 51.5%CC, 37.4%CT,
13.1%TT para C677T y 4%CC, 39.4%AC y 58.6%AA para
A1298C. En el grupo A se observó asociación significativa del
alelo T con la presencia de fiebre (p=0.029) y estomatitis
(p=0.003). Por otro lado, los niños que presentaron toxicidad
neurológica tuvieron al menos un alelo T. En el grupo B, no se
observó asociación significativa entre genotipo y toxicidad. El
polimorfismo A1298C no presentó asociación con las variables
consideradas. En la serie analizada el alelo T sería un alelo de