RESÚMENES DE LAS COMUNICACIONES - Medicina (Buenos Aires)

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MEDICINA - Volumen 64 - (Supl. II), 2004
confocal. Llamativamente, mediante dot-blots, observamos una
concentración mucho mayor de MUC1 soluble (shedding) en los
sobrenadantes de las células CFDE. Agradecimientos: UBA,
CONICET, Beca Carrillo-Oñativia. Los resultados sugieren que
la actividad mitocondrial podría esta modulada por la actividad
del CFTR. La mayor secreción de MUC1 soluble podría explicar
la mayor susceptibilidad de los pacientes a las infecciones
bacterianas.
83. (7809) ROL DEL SEGMENTO TRANSMEMBRANAL M3
EN LA ACTIVACION DEL RECEPTOR NICOTINICO. DE
ROSA, MARIA JOSE; SPITZMAUL, GUILLERMO ; BOUZAT,
CECILIA
Instituto De Investigaciones Bioquimicas De Bahia Blanca
El receptor nicotínico (AChR) es un pentámero formado por
subunidades homológas. Cada subunidad posee 4 segmentos
transmembranales (M1-M4). Para determinar el rol de M3 en la
activación del AChR construímos subunidades quiméricas reemplazando
dicho segmento por el de otras subunidades, y evaluamos
los cambios funcionales mediante registros de canal único.
Cuando M3 de la subunidad alfa1 es reemplazado por el de la
subunidad alfa7 neuronal, la duración del canal abierto disminuye
significativamente y los tiempos de cierre se prolongan. El
análisis cinético revela un descenso de 6 veces en la velocidad
de apertura del canal (ß) y un incremento de 2 veces en la velocidad
de cierre (alfa). Cuando M3 de alfa1 es reemplazado por
el de la subunidad epsilon las aperturas se prolongan y la velocidad
de cierre disminuye 20 veces. La probabilidad de apertura
para este AChR es máxima a 1 µM ACh. Por el contrario, en la
quimera inversa, M3 de alfa en epilon, los canales son breves y
con cierres prolongados, ß disminuye 2.5 veces y alfa aumenta
5 veces. También estudiamos los sitios de interacción de M3 con
M2, segmento que forma el poro, propuestos a partir de la estructura
atómica. Mutamos el aminoácido presente en M2 al existente
en M3 y viceversa (alfa L250I-I296L y L257I-I289L) y luego
combinamos ambas mutantes para reconstituir el par presente
en el AChR salvaje. L250I aumenta 8 veces alfa y disminuye ß
a la mitad; I296L aumenta 2 veces alfa. La mutante doble
(L250I+I296L) revierte ß a su valor normal a la vez que atenúa
la disminución de alfa ocasionada por las mutaciones individuales.
L257I e I289L afectan solamente alfa elevándola 3.6 y 2
veces, respectivamente. La combinación de ambas presenta una
población de cinética semejante a la salvaje y una de canales
breves. Nuestros resultados revelan que el segmento M3 contribuye
a la activación del AChR y que su contribución es específica
para cada subunidad. Además proveen evidencia experimental
acerca del rol de las interacciones de M3 con M2 en el
gatillado del AChR.
84. (7960) ESPECIFICIDAD DEL TRANSPORTE DE
CATIONES POR LA PMCA. JAITOVICH, MARIA DEL MAR;
ROSSI, JUAN PABLO FC
Facultad de Farmacia y Bioquimica
La Ca(2+) ATPasa de membrana plasmática (PMCA) de
eritrocitos humanos cataliza el transporte de Ca(2+). Se ha sugerido
que puede transportar otros metales divalentes (Olson y
Cazort, 1969, Pfleger y Wolf, 1975). El transporte es activado por
calmodulina (CaM). Es conocido que CaM puede unirse a otros
metales como el Pb(2+) (Kern y col. 2000). Dado que Ca(2+)
contamina las sales en concentración suficiente para catalizar la
PMCA, es difícil determinar la especificidad del transporte de
PMCA por otros cationes. Estudiamos la capacidad de hidrólisis
del ATP por PMCA con una serie de divalentes midiendo la actividad
enzimática con y sin CaM, en ausencia y presencia de
Ca(2+) contaminante. Las membranas de eritrocitos fueron incubadas
con 50 uM de divalente y se determinó el Pi producido
(Fiske-Subbarow). Además del Ca(2+), el Ba(2+) y en menor
proporción Mn(2+) >Ni(2+)>Co(2+)>Cu(2+)=Pb(2+)>Sr(2+)
>Sn(2+)>Fe(2+) pueden estimular la ATPasa. Por el contrario
Zn(2+) y Cd(2+) inhiben la actividad. Para evaluar si la activación
de PMCA puede deberse a la interacción de CaM con el
catión, estudiamos la capacidad de unión de CaM a dichos
cationes utilizando la sonda 8-anilino-1-ácido naftalenosulfónico
(ANS). Al unirse con un metal adecuado CaM sufre un cambio
conformacional, expone sitios hidrofóbicos que interactúan con
ANS emitiendo fluorescencia (da Silva y col. 2001). La excitación
del complejo CaM-ANS- divalente se realizó a 368 nm y se
registró la emisión entre 370 y 570 nm. Se tituló la unión al complejo
mediante agregado de EGTA. Los resultados preliminares
muestran que Ca(2+) y Ba(2+) se unen al complejo CaM-ANS,
con una Kd de 0.493 ± 0.066 uM y 11.93 ± 4.52 uM respectivamente.
Estos resultados sugieren que PMCA puede ser activada
no solo por Ca(2+), sino tambien por otros cationes divalentes,
directamente o a través de su interacción con CaM.
ENFERMEDADES NO INFECCIOSAS: ESTUDIOS
BÁSICOS, CLÍNICOS Y PATOLOGÍA
85. (6856) ASPECTOS MORFOLOGICOS Y FUNCIONALES
DE POBLACIONES CELULARES DEL SISTEMA INMU-
NE Y DE CELULAS ASOCIADAS AL MISMO, EN BOVI-
NOS INTOXICADOS CON SOLANUM GLAUCOPHYLLUM
(SG). FONTANA, PAULA (1); LAGUENS, GRACIELA (2);
BARBEITO, CLAUDIO (1); DI GIROLAMO, WANDA (2);
COSTA, ENRIQUE (1); CORONATO, SILVIA (2); GIMENO,
EDUARDO (1); PORTIANSKY, ENRIQUE (1)
(1) Instituto de Patología. FCV. UNLP. (2) Cátedra de Patología
B. FCM. UNLP.
La calcinosis enzoótica es una intoxicación crónica provocada
por la ingestión de plantas calcinogénicas que poseen
glucósidos del 1,25 dihidroxi-vitamina D[3]. La vitamina D[3] tiene
acción inmunomoduladora. Nuestro objetivo fue determinar la
respuesta del sistema inmune de bovinos ante la ingestión de
SG. Vaquillonas cruzas (n =10) recibieron 50 g de hojas molidas,
repartidas en 2 tomas semanales, durante 15, 30 o 60 días.
Los animales fueron sacrificados de a pares al final del período
de intoxicación. Un grupo fue intoxicado durante 15 días pero
sacrificado a los 60 días pi (E1560). Los controles se sacrificaron
al día 0 y 60 pi. De todos los animales se extrajeron
macrófagos peritoneales para las pruebas de fagocitosis. Los
linfonodos subilíaco y cervical superficial fueron procesados en
fresco o incluídos en parafina, respectivamente. De los primeros
se extrajeron células dendríticas para la inmunomarcación con
anticuerpos monoclonales anti S-100. Cortes de 5 µm se tiñeron
con HE o con inmunomarcación para S-100 y se analizaron
morfométricamente. La actividad fagocítica de los macrófagos
peritoneales disminuyó progresivamente en los animales
intoxicados. Histológicamente se observó una reducción del área
paracortical por expansión de los centros germinativos con numerosos
macrófagos con cuerpos tingibles y dilatación de los
senos medulares. En la inmunomarcación de células dendríticas
aisladas y de cortes de tejidos se observó una reducción significativa
de las mismas con respecto a los controles de 29,92% a
los 15 días pi, 60,40% a los 30 días pi y 73,57% a los 60 días
pi. Los animales E1560 mostraron una reducción del 29,98%. Los
resultados del presente trabajo demuestran que la intoxicación
con SG genera alteraciones estructurales y funcionales del sistema
inmune y de las células relacionadas con el mismo.
86. (7010) EFECTO INSULINOMIMÉTICO DEL VANADATO
SOBRE LA BIOSÍNTESIS DEL HEMO. GEREZ, ESTHER;
OLIVERI, LEDA; VAZQUEZ, ELBA (1); BATLLE, ALCIRA
CIPYP-CONICET. (1) Departamento de química Biológica
En los ataques agudos de porfiria el tratamiento con hidratos
de carbono reduce rápidamente la producción y excreción de
precursores del hemo tales como el ALA. Se ha demostrado en
roedores y embriones de pollo que la glucosa inhibe o previene
la inducción de la enzima ALA-S. A pesar de su aplicación tera-