RESÚMENES DE LAS COMUNICACIONES - Medicina (Buenos Aires)

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MEDICINA - Volumen 64 - (Supl. II), 2004
54. 8091 PLEGAMIENTO ANÓMALO DE APOLIPOPRO-
TEÍNA A-I INDUCE AMILOIDOSIS. TRICERRI, M. ALEJAN-
DRA; FERREIRA, SERGIO T.
INIBIOLP, Fac. Cs. Médicas, Universidad Nacional de La
Plata, La Plata, Argentina. Departamento de Bioquímica
Médica, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de
Janeiro, Brasil.
Las amiloidosis están caracterizadas por depósitos extracelulares
de proteínas fibrilares anormales. La apolipoproteína A-I
(apoA-I) humana normalmente no está involucrada con estas
patologías. Sin embargo, un caso de severa amiloidosis asociada
con arteroesclerosis se observó cuando la apoA-I presenta
una deleción de un residuo de lisina en una región central de la
proteína (apoA-I Lys107-0). Para detectar los posibles factores
que predisponen esta precipitación anómala, analizamos el plegamiento
de la proteína mutante mencionada, comparada con la
apoA-I salvaje (wt). Análisis de denaturación química y utilizando
presión hidrostática, indican que la apoA-I Lys107-0 es más
inestable y tiene más tendencia a formar estructura de hoja beta
con el tiempo de incubación, en particular a pH ácido. En estas
condiciones la denaturación deja de ser cooperativa, sugiriendo
estados de plegamiento intermedio. Asimismo, la proteína
mutante incubada a pH ácido presenta aumento de turbidez y une
significativamente más tioflavina-T que la wt, indicando su precipitación
en forma de fibras amiloides. En otros ensayos, la
apoA-I Lys107-0 incubada en presencia de fosfolípidos negativos
aumentó significativamente su capacidad de unión a
tioflavina-T. Estos resultados sugieren que la precipitación anómala
de la apoA-I Lys107-0, es mediada por conformaciones de
plegamiento intermedio y estructura de hoja beta, inducidas por
un descenso de pH. Esta situación puede estar favorecida por
acidosis asociada a la enfermedad cardiovascular, ó por un
microambiente acídico debido a la proximidad de fosfolípidos de
membrana cargados negativamente. Este trabajo fue subsidiado
por el Ministerio de Salud de la Nación (AR), la Howard Hughes
Medical Institute, Fundaçào de Amparo à Pesquisa do Estado do
Rio de Janeiro y Conshelo Nacional de Desenvolvimento Científico
e Tecnológico (BR)
55. (8126) EXPRESIÓN Y ACTIVIDAD DE E-NTPDASAS EN
HEPATOCITOS DE TRUCHA. PéREZ RECALDE, MERCE-
DES; FAILLACE, M. PAULA; PAFUNDO, DIEGO E.;
SCHWARZBAUM, PABLO J
IQUIFIB, Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA
Las E-NTPDasas son enzimas de membrana que hidrolizan
nucleósidos di- y trifosfato del medio extracelular. Estas enzimas
podrían modular la regulación de volumen de células hepáticas.
En hepatocitos de trucha el medio hipotónico induce aumento de
volumen, seguido de una disminución volumétrica llamada RVD.
Se postuló que el RVD puede ser mediado por ATP extracelular,
y que la [ATP] puede ser modulada por E-NTPDasas. Se utilizaron
hepatocitos de trucha para: 1) identificar E-NTPasas y caracterizar
su actividad; 2) establecer su función durante el RVD.
Como los nucleótidos son impermeables al hepatocito, la liberación
de [g-(32)P]Pi de[g-(32)P]ATP permite estimar la actividad
ATPásica de una E-NTPDasa, mientras que la formación de [a-
(32)P]Pi de [a-(32)P]ATP permite verificar la presencia de
ectoenzimas que desfosforilan totalmente el ATP. En presencia
de 5 µM [g-(32)P]ATP la actividad ATPásica fue 0.21±0.02 nmol/
10[6] cels/min mientras que con 5 µM [a(32)-P]ATP, la actividad
fue 7.1±0.4x10[-3] nmol/10[6] cels/min. La actividad ectoATPasa
vs ATP (0.5 µM a 1 mM) mostró un K ½ de 246 ± 105 µM. Si en
hepatocitos de trucha el aumento de volumen generara salida de
ATP y activación de RVD, la incubación de estas células con
removedores de nucleótidos debería inhibir el RVD significativamente.
En efecto, 3 U/ml de apirasa o de Na,K-ATPasa,
inhibieron el RVD en 60-78%, demostrando que nucleótidos
endógenos participan en esta respuesta. Microsomas de
hepatocitos fueron examinados por Western Blot. Se utilizaron
anticuerpos contra E-NTPDasas de mamífero, detectándose proteínas
de 55-65 kDa. Esto sugiere que existen regiones conservadas
en las proteínas de ambas clases de vertebrados. Conclusión:
los hepatocitos de trucha presentan al menos una E-
NTPDasa con actividad ATPásica, acoplada a un sistema de
desfosforilación total del ATP extracelular. E-NTPDasas estarían
implicadas en la regulación volumétrica de células sometidas a
medio hipotónico. Subsidios F. Antorchas, UBA, CONICET y
ANPCyT (11017).
CARDIOVASCULAR, RESPIRATORIO Y RENAL 1
56. (6866) EFECTO DEL PÉPTIDO NATRIURÉTICO C SOBRE
LA ACTIVIDAD DE LA ÓXIDO NÍTRICO SINTASA. PAR-
TICIPACIÓN DEL RECEPTOR NATRIURÉTICO C. COS-
TA, MARíA DE LOS ÁNGELES; ELESGARAY, ROSANA;
PULSONI, PAULA; BALASZCZUK, ANA; ARRANZ, CRIS-
TINA
Fac. de Farmacia y Bioquímica, UBA - IQUIMEFA,
CONICET.
En trabajos previos mostramos que la activación de la óxido
nítrico sintasa (NOS) y el aumento de óxido nítrico (NO), inducidos
por el péptido natriurético atrial, participan en los efectos
hipotensor y diurético del péptido. El péptido natriurético C (CNP)
es otro integrante de esta familia de péptidos, se expresa en sistema
nervioso, endotelio vascular, riñón y corazón entre otros tejidos
y sus efectos, mediados principalmente por la interacción con
los receptores NPR-B y/o NPR-C, involucran veno y arteriodilatación
e hipotensión. El objetivo de este trabajo fue estudiar los
cambios en la actividad de la NOS inducidos por el CNP, el tipo
de receptor y los posibles mecanismos de señalización involucrados.
Se midió la actividad de NOS (pmol L-[U14C] citrulina/g
tejido) con L-[U14C]-arginina como sustrato luego del agregado
de CNP (1µM), cANP (4-23) (1µM, agonista específico de NPR-
C) y de toxina Pertussis (800 ng/ml, TxP, inhibidor de la proteína
Gi) en arteria aorta, aurícula, ventrículo y riñón de ratas normotensas.
La actividad de NOS en aorta, aurícula y ventrículo aumentó
significativamente en presencia de CNP comparado con el
basal (266.8±1.3 vs 217.3±4.4; 284.1±1.1 vs 233.6±3.6; 230.1±3.8
vs 175.3±2.8; p