62794 Platelia Aspergillus Ag.pdf - BIO-RAD

4. Opción de bloque calefactorCaliente los tubos durante 6 minutos en un bloque calefactor a 120ºC. Los tubos deben colocarseen el block sólo cuando se alcance la temperatura indicada (*).OOpción baño maríaSi utiliza un baño maría: caliente los tubos durante 3 minutos a 100°C (*). Los tubos sólo debencolocarse en el baño maría cuando se haya alcanzado la temperatura indicada.5. Retire cuidadosamente los tubos calientes del bloque calefactor o del baño maría y colóquelosen una centrifugadora. Centrifugue los tubos a 10.000 x g durante 10 minutos. Utilice elsobrenadante para la detección del antígeno de galactomano.6. Pruebe el sobrenadante usando el siguiente procedimiento. Después de la preparación, elsobrenadante puede retirarse y conservarse a 2-8°C hasta 48 horas antes de la prueba. Si elanálisis de los resultados indica que es necesario repetir la prueba, tome otra parte alícuota dela muestra para el ensayo.(*) Para el éxito de la prueba es esencial respetar estrictamente la temperatura y el tiempo indicados,así como el uso de los materiales recomendados.No se base únicamente en la temperatura que aparece en el aparato; compruebe que latemperatura cumple las especificaciones usando un termómetro calibrado que se introducirá enun tubo que contenga aceite mineral: en el interior del tubo debe alcanzarse 120°C en un bloquecalefactor y 100°C en un baño maría.Procedimiento EIACumpla estrictamente el protocolo propuesto.Cumpla las buenas prácticas de laboratorio.1. Lleve los reactivos a temperatura ambiente (+18-25°C) al menos 30 minutos antes de utilizarlos.2. Prepare la solución de lavado de trabajo.3. Prepare una tabla para la identificación de pruebas y controles de muestras de sueros/líquido LBAen microplacas. Use un pocillo para el Suero de control negativo (R3), dos pocillos para el Suero decontrol de corte (R4) y un pocillo para el Suero de control positivo (R5).1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12A R5 S5 S13B R4 S6C R4 S7D R3 S8E S1 S9F S2 S10G S3 S11H S4 S124. Retire el portaplacas y las tiras de micropocillos (R1) de la bolsa de placas. Vuelva a colocar en labolsa, con el desecante, todas las tiras no utilizadas y selle nuevamente la bolsa.5. Invierta la botella de conjugado (R6) antes de usarla para homogenizar los componentes. Añada 50µL de Conjugado (R6) a cada pocillo. Luego añada 50 µL del sobrenadante de suero/LBA tratado acada pocillo, como se indicó anteriormente. No añada muestras de líquido LBA/suero a los pocillosantes del conjugado.6. Precinte la placa con un sellador u otros medios para evitar la evaporación, asegurándose de quetoda la superficie quede herméticamente tapada.7. Incube la microplaca en un incubador de microplacas seco durante 90 ± 5 minutos a 37°C (± 1°C).8. Retire el sellador de placas. Aspire el contenido de todos los pocillos en un recipiente para residuos(que contenga hipoclorito sódico). Lave la placa 5 veces con un lavador de microplacas (usando800 µL de solución de lavado de trabajo). Después del lavado, invierta la microplaca y limpiesuavemente con un papel absorbente para eliminar los restos de líquido.63