mise à jour n° 2 année 2009

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Figure 2 : Colonies de Trichosporon inkin sur milieu CHROMagar Candida ® . Les Trichosporon spp. sont capables d’hydrolyser l’urée grâce à une uréase. Ce dernier test permet de les distinguer des Geotrichum spp., champignons produisant aussi des arthrospores (voir section Diagnostic différentiel). Les résultats de quelques tests de croissance ou d’assimilation de sucres montrent qu’ils peuvent être très variables selon les conditions de réalisation, et donc d’un intérêt limité pour une identification correcte des espèces (Tableau II). Les principaux systèmes d’identification des levures commercialisés comme API Candida ® , API20C AUX ® , API32C ® (Biomérieux), Auxacolor2 ® (BioRad) ne permettent pas d’identifier les différentes espèces de Trichosporon, même si quelques espèces (T. asahii, T. inkin, T. mucoides) font partie des bases de données. De plus, la plupart des ces bases de données ne comportent pas les nouvelles espèces décrites (Pincus et al., 2007 ; Chagas- Neto et al. 2008). Les Trichosporon spp. possèdent dans leur paroi des antigènes similaires au polysaccharide de la capsule de Cryptococcus neoformans. C’est pourquoi la recherche d’antigène cryptococcique dans le sérum des patients peut s’avérer positive dans les cas de trichosporonoses disséminées (Herbrecht et al., 1993 Girmenia et al., 2005). Identification génomique Les techniques d’identification basées sur l’aspect morphologique et les tests biochimiques, largement utilisées en routine dans les laboratoires, ne permettent pas de distinguer les principales espèces de Trichosporon. L’identification des espèces de Trichosporon nécessite donc des techniques moléculaires basées sur l’étude de l’ADN des souches. Ces techniques sont généralement réalisées dans les centres de référence. L’amplification par PCR d’une partie du gène de la petite sous-unité ribosomale permet d’identifier le TRICHOSPORON SPP. Figure 3 : Colonies de Trichosporon inkin sur milieu Sabouraud additionné d’antibiotiques. genre Trichosporon sans pouvoir en distinguer les différentes espèces (Sugita et al., 1998). L’étude du séquençage des régions ITS (Internal Transcribed Spacer) de l’ADN de la petite sous-unité ribosomale permet de distinguer 17 espèces, dont les 6 principales isolées en pathologie humaine, et 5 variétés (Sugita et al., 1999). Cependant, cette technique ne permet pas de distinguer des espèces proches comme T. domesticum et T. montevideese (Sugita et al., 2002).De récentes études sur le séquençage de la région IGS1 (Intergenic Spacer) située entre les gènes 26S et 5S ribosomaux montrent de plus grandes variations que dans la région ITS (Sugita et al., 2002). Le séquençage de la région IGS1 possède donc le double avantage de pouvoir identifier les différentes espèces décrites, même proches, et de pouvoir être utilisé comme outil épidémiologique dans des études phylogénétiques (Rodrigues-Tudela et al., 2007). Diaz et Fell ont décrit une technique associant une PCR, une hybridation avec des sondes de capture ciblant les régions D1/D2 ou ITS quand celles-ci sont suffisamment discriminantes et les régions IGS pour les espèces proches, ainsi qu’une détection par cytométrie en flux. Cette technique permet une identification correcte des différentes espèces de Trichosporon mais est difficilement applicable en routine (Diaz et Fell, 2004). Diagnostic différentiel Le genre Trichosporon est clairement distinct des champignons du genre Geotrichum capables aussi de produire des arthrospores. La présence de blastospores (conidies latérales) généralement observées chez les Trichosporon spp. ne doit plus être utilisée comme critère de différenciation des Geotrichum spp. En effet, certaines espèces telle que G. fermentans ou G. capitatum, sont capables de produire des blastoconidies (de Hoog et al., 1986). Section XII – Chapitre 3 4 / 6 © ESKA octobre 2009 – M.A.J. n° 2
Les Trichosporon spp. se distinguent de Geotrichum spp par leur capacité à hydrolyser l’urée grâce à une uréase, absente chez les Geotrichum spp. SENSIBILITÉ AUX ANTIFONGIQUES L’identification de l’espèce, qui n’est généralement pas réalisée en routine au laboratoire, ne sera connue qu’après plusieurs jours voire plusieurs semaines et ne peut donc servir à orienter le choix thérapeutique. La réalisation d’un test de sensibilité est indispensable pour toute souche responsable de trichosporonose invasive. Les informations concernant la sensibilité in vitro des Trichosporon spp. aux antifongiques demeurent limitées. En effet, les techniques par microdilution ne sont standardisées que pour les Candida et/ou Cryptococcus neoformans (CLSI, 2008 ; EUCAST, 2008). De plus, la plupart des études ont été réalisées sur des Trichosporon identifiés « T. beigelii » selon l’ancienne nomenclature et dont l’espèce n’a pas été déterminée avec exactitude. Bien qu’aucun seuil ne soit défini pour établir la sensibilité des Trichosporon spp., il apparaît que les concentrations minimales inhibitrices (CMI) sont souvent très élevées avec l’amphotéricine B (Walsh et al., 1990). Les azolés possèdent une certaine activité in vitro, cependant des CMI élevées vis-à-vis du fluconazole et de l’itraconazole ont été décrites pour certaines souches (Walsh et al., 1990, Wolf et al., 2001). Les triazolés (voriconazole, posaconazole, ravuconazole), possèdent une bonne activité in vitro sur les Trichosporon spp. avec une possible activité fongicide (Espinel ingroff, 1998 ; Paphitou et al., 2002 ; Falk et al., 2003). Récemment, des études réalisées sur des souches dont l’espèce est parfaitement définie ont confirmé l’activité médiocre de l’amphotéricine B avec des CMI allant jusqu’à 8 µg/ml essentiellement pour les espèces T. asahii, T. faecale et T. coremiiforme (Paphitou et al., 2002 ; Rodriguez-Tudela et al., 2005). Dans ces mêmes études, le voriconazole présentait une bonne activité in vitro avec des CMI moyennes inférieures à 0.14 µg/ml quelle que soit l’espèce testée (Rodriguez-Tudela et al., 2005). La flucytosine et les échinocandines sont constamment inactives in vitro sur les Trichosporon spp. CONCLUSION Le diagnostic d’une trichosporonose repose sur l’examen mycologique. En effet, seule la culture TRICHOSPORON SPP. mycologique permet un diagnostic de certitude en identifiant le Trichosporon sp. en cause. L’identification de l’espèce ne sera réalisée que sur les souches responsables d’infections profondes, par des techniques spécialisées de biologie moléculaires. Les trichosporonoses disséminées sont diagnostiquées essentiellement chez le patient d’hématologie profondément neutropénique. Ce sont des infections qui restent très rares mais graves avec un taux de mortalité de plus de 70 %. BIBLIOGRAPHIE Ando, M., T. Sakata, K. Yoshida, H. Yamasaki, S. Araki, K. Onoue, and T. Shinoda. 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