LAPORAN AKHIR PROGRAM RISET INSENTIF 2010 - KM Ristek

More documents

Recommendations

Info

·.. bebas di daerah perakaran (Fallik et al. 1988). Telah dilaporkan pula bahwa strain Azospirillum halopraeferans yang tumbuh pada tanah salin di Brazil dapat melarutkan fosfat (P) tidak tersedia menjadi tersedia bagi tanaman selain dapat menambat N2 (Seshadri et al., 2000). 2.2. Rekayasa genetik pada Azospirilum Pendekatan modem dengan teknik genetika molekular dapat digunakan untuk memperbaiki sifat genetik suatu strain. Untuk mengurangi kekhawatiran terhadap perpindahan gen di rhizosphere yang tidak diinginkan, transfer gen ke dalam kromosom merupakan pili han yang dipilih. Tetapi hal itu tidak mudah karena kemungkinan system yang berbeda dalam hal cell machinery dan mekanisme regulasinya antara sel donor dan sel resipien. Laporan menmgenai perbaikan genetik pada Azospirillum dengan rekayasa genetik masih terbatas, yaitu pada tahap mutasi dengan kimiawi atau transposon, metode deteksi dengan gen gfp dan penelitian tentang marka gen untuk deteksi. Perbaikan genetik dari Azospirillum ini telah dilaporkan dengan menggunakan konstruksi mutan dengan transposon Tn5. Pengubahan pada open reading frame (ORF) pada 840 bp dan 280 asam amino (ORF280) pada mutan Tn5 pada A. brasilense menghasilkan fenotipe pleiotrophik yang mempunyai kemampuan menambat N2 lebih bagus dibandingkan dengan wild-type. Analisis fusi nifH-gusA pada mutan dan wild-type memperlihatkan bahwa mutasi pada ORF280 akan meningkatkan tingkat ekspresi nifHgusA (Ramos et al. 2002; Xi et al. 1999). Manipulasi genetik untuk mendeteksi bakteri telah dilaporkan pula oleh Liu et al (2003). Gen gfp, pengkode protein green fluorescent, telah dimasukkan ke dalam kromosom beberapa Azospirillum spp., untuk metode deteksi bakteri pada akar-akar jagung. Gen gusA, pengkode enzim ~-glucuronidase telah digunakan pada A. brasilense Sp7 untuk mengevaluasi pengaruh O 2 pada ekspresi gen (Sun et al. 2001), dan untuk studi kolonisasi pada akar padi dan gandum oleh A. /ipoferum (Chebotar et al. 1999; Steenhoudt et al. 2001). Double-tagging dari gen gfp, dikombinasikan dengan gen gusA pada transposon mini-Tn5, telah diinsersikan pada beberapa PGPB (Bakteri penghasil honnon pertumbuhan), tennasuk A. brasilense. Metode doble-tagging ini dilaporkan merupakan 5
• • cara yang bagus untuk studi ekspresi gen pada Azospirillum dan lingkungannya pada tahap kolonisasi akar (Ramos et al. 2002; Xi et af. 1999). Marker kromosom yang stabil pengkode enzim ~-galactozidase, In5 - lacZ, telah diinsersikan ke strain A. brasilense yang dapat tumbuh pada suhu rendah. Marker lacZ-nifA telah diinsersikan ke A. brasilense Cd untuk studi kolonisasi perakaran dibawah kondisi stres garam (Fischer et al. 2000) dan kolonisasi endofit dari kecambah gandurn yang telah diperlakukan dengan 2,4 D (kolonisasi para-nodule) (Kennedy et al. 1998). 2.3. Proses Mutagenesis untuk Perbaikan genetik strain Azospirillum Mutagen adalah suatu bahan, bisa berupa fisik atau kimiawi, yang dapat mengubah sifat genetik (dengan mengubah komposisi DNA) dari suatu organisme. Mutasi genetik pada sekuen nukleotida meliputi substitusi pada pasangan basa dan insersi dan delesi dari satu atau lebih sekuen DNA. Cara kerja dari mutagen dapat digolongkan ke dalam beberapa kategori sebagai berikut: (1). Beberapa mutagen berfungsi sebagai basa analog yang dapat disisipkan ke rantai DNA pada proses replikasi. (2). Beberapa mutagen bereaksi dengan DNA yang menyebabkan perubahan struktur dan menyebabkan kesalahan mengkopi templat DNA pada waktu proses replikasi, dan (3). Beberapa mutagen menyebabkan sel mensintesa bahan kimia yang menyebabkan efek mutasi. EMS merupakan mutagen potensial untuk menghasilkan mutasi poin yang menyebabkan pergantian OIC menjadi AlI, delesi atau rearrangement kromosom (Anderson, 1995). Delesi atau rearrangement pada beberapa gen dapat pula disebabkan oleh formaldehyde (Moerman dan Baillie, 1981). Mutasi dengan EMS pada inkubasi 4 jam pada Serratia marcescens OPS-5 dilaporkan dapat menghasilkan mutan yang meningkatkan atau menurunkan kemampuan melarutkan P (Iripura et al., 2007). Hasil penelitian tahun lalu sudah didapatkan 89 isolat Azospirillum dari berbagai daerah seperti Bandung, Surakarta, Purwakarta. Dari 89 iso1at Azospirillum itu telah dipilih 22 isolat Azospirillum yang berperan ganda sebagai pelarut P, menghasilkan enzim nitrogenase dan memproduksi lAA. Dari ke-22 isolat tersebut telah dipilih Aj Bandung 6.4.2.1 karena mempunyai kemampuan melarutkan P, aktivitas nitrogenase dan produksi lAA yang relatif tinggi dibandingkan isolat yang lain. Ketiga isolat tersebut telah diidentifikasi molekular berdasarkan sekuen 16s rDNA (Susilowati et al., in prep.) dan 6
Page 1 and 2: ----~- --- • a. .~ LAPORAN AKHIR
Page 3 and 4: · .. LAPORAN AKHIR PROGRAM RISET
Page 5 and 6: • • RINGKASAN Rekayasa Genetik
Page 7 and 8: • • DAFTARISI Halaman LEMBAR I
Page 9 and 10: • • DAFTAR GAMBAR Gambar Gambar
Page 11 and 12: • • and Lin 1984). Peningkatan
Page 13: • • BAB II. TINJAUAN PUSTAKA M
Page 17 and 18: • • BAB IV. METODOLOGI Rekayas
Page 19 and 20: • • c. Skrining mutan berdasark
Page 21 and 22: • • rpm dengan suhu 4°C selama
Page 23 and 24: • • BAB V. HASIL DAN PEMBAHASAN
Page 25 and 26: · ~ Dari hasil pengamatan mutan se
Page 27 and 28: • • diinkubasi dengan larutan E
Page 29 and 30: • • Tabel 3. Sepuluh isolat mut
Page 31 and 32: -E 120 c... c... 100 « 80 ~ CJ) 60
Page 33 and 34: • • 500 450 400 E c.. 350 c.. 3
Page 35 and 36: · ~ Dari hasil pengujian stabilita
Page 37 and 38: • • BAB VII. PERKIRAAN DAMPAK H
Page 39 and 40: Lestari, P, D.N. Susilowati, dan E.
Page 41 and 42: · ~ Tarrand, J. J., N.R. Krieg an
Page 43 and 44: • • 35 AzM 1.7.2.15 0.9 1.4 1.6
Page 45: 117 AzM 5.7.2.11 1 2 2.0 118 AzM 5.

LAPORAN AKHIR PROGRAM RISET INSENTIF 2010 - KM Ristek

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?