LAPORAN AKHIR PROGRAM RISET INSENTIF 2010 - KM Ristek

• •
BAB IV.
METODOLOGI
Rekayasa genetik Azospirillum unggul untuk menurunkan penggunaan pupuk nitrogen
sebesar 30% dan penggunaan pupuk fosfat sebesar 15% dari stan dar pemupukan untuk padi
sawah dilakukan di Laboratorium Biologi Molekular dan Laboratorium Bank Oen di Balai
Besar Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya Oenetik P ertani an,
Bogor.
a. Materi yang digunakan
Mikroba yang digunakan dalan penelitian ini adalah isolat Azospirillum terpilih
indigenus Indonesia yang dapat berfungsi ganda melarutkan P, mempunyai aktivitas
nitrogenase, dan memproduksi lAA hasil isolasi dan koleksi Laboratorium Mikrobiologi,
Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik
Pertanian (BB-Biogen) yang diisolasi, dan diidentifIkasi pada tahun 2009. Penelitian iill
terdiri dari 3 kegiatan: (1) Perbaikan genetik strain Azospirillum dengan mutagenesis
EMS; (2) Pengaruh mutasi kimiawi Azospirillum terhadap aktivitas nitrogenase dan
produksi lAA, dan (3) Kestabilan sifat Azospirillum hasil mutasi terhadap kemampuan
pelarutan P dan produksi nitrogenase.
Tahap penelitian yang akan dilakukan diuraikan sebagai berikut:
b. Peremajaan isolat Azospirilum sp
Tiap-tiap koloni tunggal diambil dengan jarurn ose dan digoreskan ke dalam media
okon dalam cawan petri (per 500 ml media terdiri atas: 3 g K2HP04, 2 g KH2P04, 2,5 g
DL-malic acid, . 1,5 g NaOH, 0,25 g yeast extract, 2,5 ml MgS04.7H20 2%, 2,5 ml NaCl
1%,2,5 ml CaCh 0,2%, 2,5 ml FeCI3.6H20 0,17%, 2,5 ml Na2Mo04.2H20 0,02%, pH
6,8, 10 g bacto agar). Inkubasi dilakukan 1 sampai 2 hari.
8