白术多糖的溶液构象及其变化 - 陕西师范大学学报

第 3 期 王 艳 丽 等 : 白 术 多 糖 的 溶 液 构 象 及 其 变 化 99
PHS—3C 精 密 酸 度 计 , 上 海 实 验 仪 器 厂 有 限 公 司 ;
WZZ—15 数 字 式 自 动 旋 光 仪 , 杭 州 科 博 仪 器 有 限 公
司 ;TU—1810 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 , 北 京 普 析 通 用
仪 器 有 限 责 任 公 司 .
1.3 方 法
1.3.1 白 术 多 糖 的 提 取 白 术 干 燥 茎 → 真 空 干 燥
24h→ 粉 碎 过 20 目 筛 →75% 乙 醇 脱 脂 → 浸 提 ( 料 液
比 1∶30, 提 取 温 度 60 ℃)→4020r/min 离 心 20
min→ 上 清 液 浓 缩 →3 倍 体 积 95% 乙 醇 沉 淀 12h→
4020r/min 离 心 20min→ 沉 淀 透 析 →4020r/min
离 心 20min→ 上 清 冷 冻 干 燥 → 白 术 粗 多 糖 (AM).
1.3.2 白 术 多 糖 的 分 离 纯 化 及 纯 度 鉴 定 采 用
DEAE—Celulose—52 色 谱 柱 (2.5cm×80cm) 和
SephadexG—200 葡 聚 糖 凝 胶 柱 层 析 对 AM 进 行 分
离 纯 化 , 凝 胶 柱 层 析 洗 脱 曲 线 呈 现 单 一 对 称 峰 , 经 高
效 液 相 色 谱 法 鉴 定 为 单 一 对 称 峰 , 确 定 其 为 均 一 组
分 (WAM).
[4]
1.3.3 刚 果 红 试 验 刚 果 红 溶 液 浓 度 为 80
mg/mL,WAM 溶 液 浓 度 为 10mg/mL,NaOH 依 次
配 成 不 同 浓 度 (0.1~1.0 mol/L, 用 邻 苯 二 甲 酸 氢
钾 标 定 ), 将 WAM 溶 液 、 刚 果 红 溶 液 、NaOH 溶 液
按 体 积 比 1∶1∶2 混 合 并 摇 匀 ,25 ℃ 下 静 置 10min
后 用 紫 外 分 光 光 度 仪 于 400~600nm 进 行 扫 描 , 依
次 测 定 混 合 液 在 不 同 浓 度 的 NaOH 下 最 大 吸 收 波
长 的 变 化 .
[5]
1.3.4 WAM 黏 度 的 测 定 用 乌 氏 黏 度 计 , 在
不 同 条 件 下 测 定 WAM 的 比 浓 黏 度 ( η ) sp .
η sp= ( η / η 0-1)/ 犆 .
式 中 : η 0
为 蒸 馏 水 的 黏 度 ; 犆 为 待 测 溶 液 的 浓 度 ; η
为 待 测 溶 液 的 黏 度 .
1.3.5 WAM 旋 光 度 的 测 定 用 WZZ—15 数 字
式 自 动 旋 光 仪 在 20 ℃ 和 589nm 钠 光 下 测 不 同 条
件 WAM 溶 液 的 比 旋 光 度 .
[6]
1.3.6 WAM 的 紫 外 吸 收 光 谱 和 圆 二 色 谱 测 定
将 WAM 配 制 成 1.0 mg/mL 的 溶 液 , 以 紫 外 吸
收 光 谱 仪 和 圆 二 色 谱 仪 进 行 测 定 , 波 长 范 围 180~
400nm. 通 过 改 变 温 度 、pH 值 、 添 加 金 属 离 子 、 络 合
剂 及 溶 剂 二 甲 基 亚 砜 (DMSO) 等 不 同 外 界 因 素 观 察
WAM 的 紫 外 吸 收 光 谱 和 圆 二 色 谱 的 变 化 , 进 而 观
察 其 构 象 的 变 化 .
2 结 果 与 分 析
2.1 刚 果 红 试 验 结 果
刚 果 红 是 一 种 酸 性 染 料 , 可 与 具 有 多 股 螺 旋 构
象 的 多 糖 形 成 配 合 物 , 配 合 物 的 最 大 吸 收 波 长 会 发
生 红 移 . 在 一 定 的 NaOH 浓 度 范 围 内 , 配 合 物 出 现
亚 稳 区 [7] .
图 1
犉 犻 犵 .1
犠 犃 犕 刚 果 红 复 合 物 的 最 大 吸 收 波 长 变 化
犆 犺 犪 狀 犵 犲 狅 犳 狋 犺 犲 犿 犪 狓 犻 犿 狌 犿 犪 犫 狊 狅 狉 狆 狋 犻 狅 狀 狑 犪 狏 犲 犾 狀 犵 狋 犺
狅 犳 狋 犺 犲 犆 狅 狀 犵 狅 狉 犲 犱 犠 犃 犕 犮 狅 犿 狆 犾 犲 狓
a. 刚 果 红 +WAM;b. 刚 果 红 .
如 图 1 所 示 ,NaOH 的 浓 度 在 0~0.5mol/L 之
间 变 化 时 , 刚 果 红 与 WAM 结 合 形 成 的 配 合 物 虽 然
也 发 生 红 移 , 但 其 配 合 物 的 紫 外 吸 收 没 有 发 生 大 的
改 变 , 即 未 出 现 亚 稳 区 , 说 明 WAM 不 具 有 三 螺 旋
结 构 .WAM 与 已 报 道 的 主 要 由 线 性 和 分 支 的 (1→
[6]
3)-β-D- 葡 聚 糖 构 成 的 多 糖 如 香 菇 多 糖 在 碱
性 溶 液 中 呈 三 股 螺 旋 构 象 不 同 , 而 与 通 过 β1→4,1
→6 糖 苷 键 相 连 的 杂 多 糖 茶 多 糖 TPS41 [7] 相 类 似 ,
可 能 为 无 规 线 团 链 构 象 .
2.2 犠 犃 犕 溶 液 比 浓 黏 度 测 定 结 果
2.2.1 浓 度 对 WAM 溶 液 比 浓 黏 度 的 影 响 不 同
浓 度 WAM 溶 液 在 25 ℃ 恒 温 水 浴 锅 中 保 温 30min
后 测 定 其 比 浓 黏 度 , 结 果 如 图 2 所 示 .
犉 犻 犵 .2
图 2
浓 度 对 犠 犃 犕 溶 液 比 浓 黏 度 的 影 响
犈 犳 犲 犮 狋 狅 犳 犮 狅 狀 犮 犲 狀 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀 狅 狀 狏 犻 狊 犮 狅 狊 犻 狋 狔 狅 犳 犠 犃 犕 狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀
可 以 看 出 WAM 的 浓 度 较 低 (1~6 mg/mL)
时 , 比 浓 黏 度 随 着 浓 度 的 增 长 幅 度 较 小 ; 在 浓 度 6~
8mg/mL 的 范 围 内 , 增 长 的 幅 度 较 大 , 说 明 随 着 溶
液 中 WAM 含 量 的 增 加 , 多 糖 分 子 之 间 相 互 聚 合 的
程 度 逐 渐 增 加 . 这 种 现 象 与 一 般 高 分 子 溶 液 的 比 浓
黏 度 特 性 相 符 [9] .
2.2.2 温 度 对 WAM 溶 液 比 浓 黏 度 的 影 响 5
mg/mL WAM 溶 液 在 不 同 温 度 的 水 浴 锅 中 保 温 30
min 后 测 定 其 比 浓 黏 度 , 结 果 如 图 3 所 示 .