DETEKSI HIBRIDISASI DALAM BIOSENSOR DNA ELEKTROKIMIA

More documents

Recommendations

Info

RNA dalam ekstrak E. coli. Gold microelectrode array terdiri dari empat pasang elektrode interdigitasi plus dua elektrode pembantu. Tahap-tahap preparasi biosensor tersebut: a) Amobilisasi probe terbiotinilasi; b) Hibridisasi dengan target; c) Hibridisasi bertingkat dengan oligonukleotida berlabel digoksigenin; d) Inkubasi dengan suatu konjugat antidigoksigenin-alkaline fosfatase; e) Penambahan p- aminofenol fosfat; f) Deteksi amperometri untuk menurunkan p-aminofenol setelah pentransferan pada chip. Pengukuran dilakukan dengan set potensial dari satu jari pada 250 mV sementara yang lainnya -50 mV. Dalam hal ini suatu resiklus terjadi antara p- aminofenol dan quinoneimine (produk reduksinya) mengamplifikasi respons amperometri. Perbedaan antara respons anodik dan katodik adalah penggunaannya sebagai signal. Dengan pengujian ini adalah memungkinkan untuk mendeteksi 10 11 – 10 10 molekul target Suatu biosensing listrik ultrasensitif DNA diajukan dengan menggunakan CNT untuk pengenalan dan untuk terjadinya transduksi (Wang et al. 2004). Alkaline fosfatase diamobilisasi pada CNT menggunakan linker karbodiimida. Hampir 10 4 kali peningkatan sensitivitas diperoleh dalam keberadaan CNT yang dimodifikasi dengan alkaline fosfatase. Bagaimanapun, jika menggunakan GC dimodifikasi dengan nanotube karbon sebagai transduser, amplifikasi kedua diperoleh (30 kali lipat), dalam kaitannya dengan penambahan akumulasi produk enzimatis α-naftol dengan keberadaan CNT. Limit deteksi yang rendah diperoleh selama akumulasi 20 menit, sekitar 1 fg/mL, atau 54 aM, atau 820 copy, atau 1.3 zmol dalam 25 µL sampel. 36 1
2.5.5. Berdasarkan Metodologi Lain Palecek et al. (2002e) mempresentasikan untuk pertama kalinya penggunaan immunogenisitas dari DNA termodifikasi untuk pengembangan biosensor hibridisasi DNA. Respons immunologi DNA dan RNA dapat ditingkatkan dengan modifikasi kimia menggunakan Os,bpy. Magnetic bead yang mengandung oligo(dT)25 diletakkan dan dihubungkan dengan Os,bpy-DNA untuk dikenali antibodi primer yang mengandung residu 25-adenin diikuti dengan interaksi dengan antibodi sekunder yang dilabel alkaline fosfatase. Dalam hal ini, setelah penambahan 1- naftilfosfat, produknya, α-naftol dapat ditentukan secara elektrokimia. Pengukuran langsung DNA target yang dimodifikasi secara kimia secara adsorptive stripping SWV pada pyrolitic graphite yang di-pretreatment pada -1,7 V selama 60 detik dalam elektrolit (bufer asetat 0,2 M, pH 5,0) juga dilaporkan. DNA dilepaskan dari magnetic bead dengan pemanasan pada temperatur 85 o C selama 2 menit, diikuti dengan penambahan NaCl hingga 0,2M. Penulis juga menunjukkan adanya kemungkinan untuk menentukan DNA-Os,bpy tanpa pemisahan sebelumnya produk tambahan dari campuran reaksi. Metodologi juga diuji dengan produk PCR 226 pb DNA dengan residu (dA)25. Setelah presipitasi etanol dan modifikasi Os,bpy, dihibridisasi dalam konsentrasi 5 dan 2,5 µg/mL. Limit deteksi dalam tahap hibridisasi dihitung adalah 3 fmol menggunakan sel 1mL. Jika menggunakan dua sistem elektrode dan 20 µL, dalam 1 pg target akan terdapat 30 amol. Evtugyn et al. (2003) mengajukan penggunaan elektrode graphite screen- printed dimodifikasi dengan DNA dan enzim untuk deteksi antibodi DNA manusia 37 1
Page 1 and 2: DETEKSI HIBRIDISASI DALAM BIOSENSOR
Page 3 and 4: 2. Deteksi Terjadinya Hibridisasi K
Page 5 and 6: Ru(bpy)3 2+ . Penentuan dilakukan d
Page 7 and 8: setelah dicelupkan dalam bufer Tris
Page 9 and 10: oligonukleotida untuk deteksi DNA H
Page 11 and 12: pengukuran dilakukan dalam larutan
Page 13 and 14: dimodifikasi dengan oligonukleotida
Page 15 and 16: diperoleh dari penurunan arus reduk
Page 17 and 18: Strategi yang lain untuk deteksi se
Page 19 and 20: Dalam konfigurasi yang lain penulis
Page 21 and 22: 5% dari urutan komplementer. Caruan
Page 23 and 24: mengikuti bangunan arsitektur dendr
Page 25 and 26: paling baik untuk melakukan hibridi
Page 27 and 28: disuspensikan dalam NaOH selama 5 m
Page 29 and 30: payudara BCRA 1 (Wang et al. 2002b)
Page 31 and 32: keberadaan hidroquinon, dilarutkan
Page 33 and 34: meningkat dalam hubungan yang linie
Page 35: dilaporkan oleh kelompok Wang (Wang
Page 39 and 40: pori membran alumina yang dilaporka
Page 41 and 42: Hashimoto, K., Ito, K., and Ishimor
Page 43 and 44: Napier, M.E. and Thorp, H. 1997a. M
Page 45 and 46: Wang, J., Rivas, G., Parrado, C., C
Page 47 and 48: Wu, K., Fei, J., Bai, W.W., and Hu,
Page 49 and 50: DAFTAR GAMBAR 49 1 Halaman Gambar 1
Page 51 and 52: JURUSAN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA D
Page 53 and 54: DAFTAR ISI 53 1 Halaman DAFTAR ISI

DETEKSI HIBRIDISASI DALAM BIOSENSOR DNA ELEKTROKIMIA

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?