Nell'ambito del progetto di ricerca dal titolo “Studio di attività ...

Capitolo 2 Rigenerazione del muscolo scheletrico
Recentemente è stato dimostrato che le cellule satellite hanno anche alti livelli di
sfingomielina nelle loro membrane plasmatiche e questo sfingolipide può essere
individuato utilizzando la proteina lisenina (Nagata et al., 2006a). Altri marcatori
riportati in letteratura includono la caveolina-1 (Volonte et al., 2005), i proteoglicani di
superficie sindecano 3 e 4 (Cornelison et al., 2001), FoxK1 (Garry et al., 1997), Sox8
(Schmidt et al., 2003), Sox15 (Lee et al., 2004), un transgene della nestina (Day et
al., 2007) e l‟anticorpo SM/C2.6 (Fukada et al., 2004). I marcatori molecolari che
riconoscono antigeni sulla superficie cellulare o modifiche genetiche derivanti dalla
produzione di proteine fluorescenti, sono particolarmente utili poiché consentono la
purificazione delle cellule satellite utilizzando tecniche di selezione basate sulla
fluorescenza. Questo tipo di tecnica è stato utilizzato con successo nei topi
Pax3eGFP/ + in cui il locus di Pax3 è stato marcato con eGFP (Montarras et al., 2005)
e nei topi transgenici per la nestina (Day et al., 2007).
Alcuni di questi anticorpi possono essere utilizzati per identificare le cellule
satellite in altre specie, per esempio Pax7 nel pollo (Halevy et al., 2004), salamandra
(Morrison et al., 2006) e Xenopus (Chen et al., 2006), mentre sia Pax7 (Reimann et
al., 2004) che la N-caderina sono utilizzabili nell‟uomo (Illa et al., 1992; Dreyer et al.,
2006).
È importante notare che mentre questi marcatori sono efficaci per l‟identificazione
delle cellule satellite su miofibre isolate, molti di essi non sono specifici delle cellule
satellite (CD34, lisenina e sindecano 3 e 4). Per l‟identificazione delle cellule satellite
su sezioni di tessuto, i più utilizzati sono probabilmente Pax7, la M-caderina e dove
possibile, Myf5/β-gal.
2.3.3 Eterogeneità delle cellule satellite
Il transgene 3F-nLacZ-E è composto di una regione regolatoria del locus del gene
delle catene leggere della miosina 1/3F (Kelly et al., 1995) i cui prodotti proteici sono
componenti integrali dell‟apparato contrattile delle miofibre veloci. Poiché questo
transgene marca tutti i mionuclei nelle fibre veloci, quei nuclei che si trovano sotto la
lamina basale e che non sono marcati dalla β-galattosidasi sono cellule satellite. Ciò
consente un‟identificazione certa della popolazione totale di cellule satellite su una
miofibra, di là dell‟espressione antigenica (Beauchamp et al., 2000). Mediante
l‟utilizzo di questo transgene, insieme con quello di topi CD34 e Myf5nLacZ/ + , è stato
dimostrato che alcuni marcatori molecolari non identificano tutte le cellule satellite
quiescenti, suggerendo una certa eterogeneità all‟interno della popolazione di riserva
nel muscolo di topi adulti giovani (Beauchamp et al., 2000).
Ancor più recentemente, è stato mostrato che una piccola percentuale di cellule
satellite identificate mediante utilizzo di Pax7, non contiene la proteina di fusione
Myf5/β-gal (Day et al., 2007). L‟eterogeneità delle cellule satellite è stata mostrata più
chiaramente nei topi mutanti Pax3eGFP/ + . Essa si manifesta non solo tra muscoli
differenti, ma anche all‟interno di uno stesso muscolo. Per esempio, nella
muscolatura degli arti inferiori, solo il muscolo Gracilus contiene un numero
significativo di cellule satellite che esprimono eGFP mentre al contrario, molti muscoli
degli arti superiori contengono un gran numero di cellule satellite eGFP-positive
(Montarras et al., 2005; Relaix et al., 2006). Anche all‟interno di uno stesso muscolo
l‟espressione di eGFP non è uniforme. Nel diaframma ad esempio, mentre la
stragrande maggioranza di cellule eGFP-positive esprime anche Pax7, altre cellule
satellite esprimono solo Pax7 o solo eGFP (Relaix et al., 2006). Questa eterogeneità
non sembra essere correlata né allo sviluppo del muscolo né alla composizione in
tipo di fibra che lo caratterizza. Quando trapiantate, queste cellule mantengono
l‟espressione di eGFP nel muscolo dell‟ospite che normalmente, non contiene questo
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