studio sulla produzione di metano nei ruminanti - FedOA - Università ...

Sostanza organica degradata
Il contenuto di ciascuna bottiglia è stato filtrato attraverso crogioli di vetro prepesati e a
setto poroso (Schott Duran, porosità #2) sciacquando con acqua distillata calda. I
crogioli sono stati posti per una notte in stufa a 103°C, e successivamente, per 3 ore in
muffola a 550°C al fine di determinare rispettivamente la sostanza secca ed organiche
residue. Quindi, per differenza è stata calcolata la sostanza organica degradata (dSO, %)
tra quella incubata e quella residua.
Acidi grassi volatili
A 6, 12, 24, 48 e 120 ore di incubazione sono stati determinati gli acidi grassi volatili
(AGV): un campione di 5 ml è stato prelevato dalle bottiglie di fermentazione,
centrifugato a 12000 giri per 30 minuti (a 10°C) e diluito 1:1 con una soluzione di acido
ossalico 0.06 M. Gli AGV (acetico, propionico, isobutirrico, butirrico, isovalerianico e
valerianico) sono stati determinati mediante gas cromatografo (ThermoElectron®
model. 8000 top Italy, FUSED SILICA Gascromatogram con OMEGAWAX 250 fused
silica capillary column SUPELCO 30 m x 0.25 mm x 0.25 mm film thickness)
utilizzando uno standard costituito dalla miscela dei sei acidi. Le temperature di analisi
sono state: forno 175°C, FID 240°C; il gas carrier (elio) è stato usato al flusso di 1,7
ml/min.
Quantificazione di gas di fermentazione
Al fine di quantificare il metano, 3 ml del gas di fermentazione sono stati prelevati in
doppio da ciascuna bottiglia dopo aver misurato la pressione e il volume totale del gas
nello spazio di testa. I campioni di gas sono stati raccolti mediante siringhe Hamilton da
5 ml munite di appositi rubinetti a tenuta di gas. Il campione prelevato è stato analizzato
utilizzando un gas cromatografo ThermoElectron® 8000 top tramite un sistema di
rilevazione a termo-conducibilità (TCD o HWD). L’ elio è stato utilizzato come gas
carrier al flusso di 30 ml/min. Le diverse aree dello strumento erano state impostate alle
seguenti temperature: forno 50°C, detector 190° C, filamenti 210°C. Al fine di
migliorare l’accuratezza della determinazione l’iniettata è stata fatta attraverso un loop.
Il campione è stato separato mediante il passaggio in una colonna HaySepQ SUPELCO
(3/16 inch, mesh 80/100).
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