Selene Araya - Stsbc.ch

Selene Araya LAM, Liceo Lugano 1
fig. 35: momento dell’inserimento del transgene. A destra il ricercatore sta inserendo un transgene tramite
un’attrezzatura specifica. A sinistra una foto dell’inserimento del transgene nel nucleo dell’ovulo di una topina
appena fecondato.
Compito all’interno del progetto: Il lavoro che ho svolto consisteva nel cercare di costruire una
piccola parte di un plasmide inserendo, grazie a enzimi di restrizione, dei geni che servissero ad
evidenziare l’espressione dell’insulina. È stata quindi solo una minima parte di questo grande
progetto.
Ricordiamo che un plasmide è un DNA circolare batterico presente nel citoplasma. Esso ha
dimensioni ridotte e si può spostare tra le cellule (non per forza uguali ma geneticamente affini)
influendo sulla variabilità genetica. I plasmidi hanno largo impiego nelle biotecnologie perché
possono essere manipolati per produrre vettori ricombinanti.
Tutti i passaggi per costruire questo plasmide richiedono tempo, condizioni specifiche di
temperature, precisione e vi è sempre una buona percentuale di insuccesso. Per questo si attua
generalmente lo stesso procedimento a più campioni allo stesso momento.
Nella fig. 39 è riassunto il lavoro che ho svolto in laboratorio che si basa sull’introduzione della
sequenza GFP nel plasmide contenente la sequenza STOP.
Il lavoro consisteva principalmente in:
• selezionare enzimi di restrizione (e studiarne le peculiarità per farli agire nel modo
corretto) per “tagliare” la sequenza nucleotidica ricercata;
• manipolare il plasmide con gli enzimi di restrizione e mettere i campioni nelle
condizioni termiche adeguate;
• attuare dei controlli grazie principalmente l’elettroforesi (dove bisogna preparare
dapprima il gel di agarosio da utilizzare e poi selezionare il campione corretto che
dovrà essere separato dal gel riassunto in fig.38);
• pipettare per unire e mescolare i preparati;
• pesare i campioni con apparecchiature specifiche per quantificare il materiale
genetico.
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