Faglig rapport 2010 - Helse Vest

372Forskningsprosjekt 911296Anne Elisabeth Christensen MellgrenFunksjonelle aspekter og molekylære endringer ved arveligeøyesykdommerProsjektansvarlig: Anne Elisabeth Christensen Mellgren (anne.christensen@med.uib.no), HelseBergen HFProsjektet har 3 deler. I det første delprosjektet etableres en musemodell for en humanøyesykdom som skyldes en mutasjon i decorin genet. I det andre studerer vi effekten avmutasjonen som vi beskrev hos en familie med ”Brittle Cornea Syndrom”. I det tredje utreder vinye familier med arvelig øyesykdom for å finne genfeilen ved sykdommen.Vi etablerer en musemodell for medfødt stromal hornhinnedystrofi, som er en tilstand der hornhinnengradvis blir uklar på grunn av avleiringer i denne. Tilstanden skyldes en punktmutasjon i decorin genet.Decorin er et protein som er lokalisert mellom kollagenfibrene i øyets hornhinne og som sørger for atkollagenorganiseringen er korrekt, slik at resultatet blir en klar og gjennomsiktig hornhinne.Mutasjonen fører til en endret leseramme og dermed uttrykkes et kortere protein enn normalt. Vi harmus både med den humane mutasjonen i decoringenet (knock-in mus) og mus som mangler decorinfordi vi har fjernet det siste eksonet i decoringenet (knock-out mus). Vi har isolert vev fra musene og eri gang med å undersøke vevet elektronmikroskopisk for å se om den humane sykdommen erreprodusert hos musene, og hvilke effekter mutasjonen eventuelt har på andre organsystem. Vi holderpå med biokjemiske studier for å se om decorin er uttrykt i forkortet form i hornhinnevev hos deforskjellige musestammene. I tillegg dyrker vi hornhinneceller og hudceller fra musene for å undersøkehvordan decorin uttrykkes i cellekultur. Dersom musene har forandringer i hornhinnen tilsvarende detvi ser hos mennesker vil vi prøve å behandle tilstanden medisinsk og genetisk. Vi vil da prøve ut lokaleksponering for siRNA mot decorin, og behandle musene med aminoglykosider, da det kan gi en øktgjennomlesing av gener med den type mutasjon vi har funnet.Vi har beskrevet en ny mutasjon og gjort nye kliniske observasjoner hos pasienter med Brittle CorneaSyndrome. Syndromet er i verdenslitteraturen beskrevet hos vel 60 pasienter, der langt de flestekommer fra land i middelhavsområdet. Det er oss bekjent kun våre to pasienter som er av nordeuropeiskavstamming. Mutasjonen er lokalisert i genet ZNF469 som har ukjent funksjon. Det har 5predikerte zinkfinger strukturer, og vår mutasjon er lokalisert i en av de konserverte cysteinene i denfjerde zinkfingeren. Denne posisjonen er trolig kritisk for de effektene mutasjoner i dette genet fører til.Vi har utført en yeast-two-hybrid analyse for å finne protein interaksjonspartnere til ZNF469. Vi harprodusert pepidantistoffer mot proteinet og klonet genet inn i en vektor som vi bruker til å synliggjørelokaliseringen av proteinet i celler. Når genet overuttrykkes i celler, ser vi at det lokaliseres ipunktformige strukturer i kjernen. Vi holder nå på å finne ut hva disse strukturene representerer, forvidere å kunne finne ut av funksjonen til dette genet. Vi har også et samarbeid med en proteomikkgruppe i Belgia som arbeider med samme sykdomstilstand.Vi har utredet 6 familier med linseluksasjon og ektopiske (ikke sentralstilte) pupiller og har i samarbeidmed Senter for Medisinsk Genetikk og Molekylærmedisin identifisert mutasjonen. Det er en 20basepar delesjon i genet ADAMTSL4. Dette er første gang noen har identifisert en mutasjon assosiertmed denne spesielle tilstanden. Arbeidet ble i 2010 publisert i et internasjonalt tidsskrift.2 vitenskapelige artikler er publisert i 2010Christensen Anne E, Fiskerstrand Torunn, Knappskog Per M, Boman Helge, Rødahl EyvindA novel ADAMTSL4 mutation in autosomal recessive ectopia lentis et pupillae.Invest Ophthalmol Vis Sci 2010 Dec;51(12):6369-73. Epub 2010 aug 11PMID: 20702823Christensen Anne E, Knappskog Per M, Midtbø Marit, Gjesdal Clara G, Mengel-From Jonas, Morling Niels, Rødahl Eyvind,Boman HelgeBrittle cornea syndrome associated with a missense mutation in the zinc-finger 469 gene.Invest Ophthalmol Vis Sci 2010 Jan;51(1):47-52. Epub 2009 aug 6PMID: 19661234Aetiology - Eye