Manual de Técnicas.DOC - USP

2.7. DETECÇÃO DE TIROSINA
Bensley & Gersh, 1933
RADQUIM 5
Preparo do reativo de Millon:
Preparar uma solução aquosa de ácido nítrico a 40%,
dissolvendo o ácido gota a gota na água (40 ml de ácido em
60 ml de água). Deixar estabilizar por 48 horas. Diluir 40
ml desta solução em 360 ml de água, conseguindo-se assim
400 ml de uma solução de ácido nítrico a 4%. Deixe
repousar por 24 horas. Saturar esta solução com excesso de
cristais de nitrato de mercúrio. Filtrar e adicionar 1,4 g
de nitrito de sódio e 4 ml da solução aquosa de ácido
nítrico a 40% (aquela inicial). O reativo de Millon assim
preparado pode ser guardado em geladeira por muito tempo.
Procedimento:
Desparafinar, levar até o álcool e colodionar os cortes.
Secar e mergulhá-los em álcool 70°, por 3 minutos.
Mergulhar em acetona anidra e deixar secar ao ar.
Cobrir com o reagente de Millon.
Levar à chama do bico de Bunsen até o aparecimento da
coloração tijolo.
Lavar bem em solução de ácido nítrico a 2% a 37°C.
Resultado: locais ricos em tirosina aparecem em vermelho
tijolo.
Observação:
a) a reação pode ser bloqueada nos cortes controles,
através do bloqueio dos radicais p-hidroxi-fenil, por
processo de iodação, da seguinte maneira (Landing & Hall,
1956):
Após colodionar os cortes, colocá-los diretamente na
solução de iodação por 24 horas; em seguida, lavar em água
corrente, voltar ao álcool absoluto, recolodionar os
cortes e realizar o método para tirosina, a partir da
etapa da acetona.
Solução de iodação:
Iodo.........................3 g
Iodeto de potássio...........6 g
Água destilada............100 ml