Manual de Técnicas.DOC - USP

2.8. DETECÇÃO DE TRIPTOFANO
RADQUIM 6
Soluções corantes:
Solução de p-dimetiaminobenzaldeído (DMAB) a 5% em HCl
concentrado
Solução de nitrito de sódio a 1% em HCl concentrado. Os
cristais de NaNO 2 são postos no HCl imediatamente antes de
se usar a solução. Mergulhar as lâminas enquanto está
havendo formação de gás.
Procedimento:
Desparafinar e levar as lâminas até álcool absoluto.
Recobrir o corte com celoidina, imergindo-o em solução
0,25% de celoidina em álcool absoluto e éter em partes
iguais durante 1 minuto.
Retirar o corte da celoidina e colocar diretamente na
solução de DMAB por 1 minuto.
Colocar diretamente na solução de NaNO 2 por 1 minuto.
Lavar em água corrente por 30 segundos.
Passar em solução de álcool ácido (HCl concentrado a 1% em
álcool 70°).
Montar.
Resultados:
Locais contendo triptofano aparecem corados em azul.
Grânulos de zimogênio das células principais do estômago:
moderadamente corados.
granulações eosinofílicas: fortemente coradas.
queratina: não se cora.
grânulos de zimogênio do pâncreas: muito corados.
células alfa da ilhota pancreática: azul claro.
células beta da ilhota pancreática: não se coram.
célula de Paneth: fortemente corada.
células absortivas do intestino: azul acinzentado claro.
fibras elásticas das artérias: não se coram.
Observações:
a) o ácido clorídrico puro é extremamente corrosivo e
fumegante; trabalhe com luvas e na capela.
b) para demonstrar células de Paneth no intestino use
animais que foram mantidos em jejum por um noite.