Manual de Técnicas.DOC - USP

3. LÍPIDEOS
3.1. SUDAN BLACK B
LIPID 1
Preparo da solução corante:
Preparar uma solução saturada de Sudan black em álcool 70°
e filtrar.
Procedimento:
Usar cortes de material fresco ou fixado em formol.
Cortar em congelação.
Imergir os cortes por 10 minutos na solução corante
filtrada.
Lavar em álcool 70° para retirar o excesso de corante ou
até que os cortes controles estejam descorados.
Lavar em água corrente.
Pode-se contracorar fracamente com hematoxilina.
Montar em glicerina.
Resultado: lipideos coram-se em negro.
Observações:
a) a adição de cálcio ao formol fixador contribui para a
retenção dos lípides ao tecido.
b) Sabe-se que os cristais de colesterol não se coram
normalmente com o Sudan black; além disso, os
fosfolipídeos se dissolvem no álcool (que é o solvente do
corante). Estes dois problemas podem ser contornados
usando-se uma solução de brometo da seguinte forma:
Obtidos os cortes, deixá-los em uma solução aquosa de
brometo a 2,5%, por 1 hora e, em seguida, lavar em uma
solução aquosa de 0,5% de metabissulfito de sódio para
retirar o excesso de brometo; lavar em água corrente e
imergir na solução corante.