Manual de Técnicas.DOC - USP

5. ÁCIDOS NUCLÉICOS
ACNUCL 1
5.1. COLORAÇÃO DE ACRIDINE ORANGE (Ganter e Jolles)
Solução estoque de Acridine Orange:
Acridine Orange....................1 g
H 2 O destilada...................1000 ml
Solução de Trabalho:
Solução Estoque de Acridine Orange.........10 ml
PBS (pH 6,0 a 6,5).........................90 ml
Corar 15 minutos na solução de trabalho de acridine
orange.
Lavar em PBS.
Cobrir a lâmina com glicerina e observar no microscópio de
fluorescência.
Observações:
a) A fixação do material deve ser feita em Carnoy ou
etanol acético; para esfregaços ou culturas de células a
fixação deve ser feita em acetona metanol.
b) O preparado descora e muda de cor depois de um tempo.
c) Alguns autores recomendam, após lavar no PBS, passar em
uma solução de cloreto de cálcio 0,1M, por 1 a 2 minutos
e, em seguida, lavar em PBS por 10 segundos, antes de
montar.
Resultado: coram-se as estruturas ricas em ácidos
nucléicos.
5.2. AZUL DE TOLUIDINA ÁCIDO
Solução corante:
Azul de Toluidina 0,5% em água; pH 3,5 (acertar com HCl
0,1N)
Procedimento:
Corar as lâminas durante 1 a 24 horas a 60°C (com o
corante pré-aquecido a esta temperatura).
Lavar em água destilada.
Imergir em molibdato de sódio ou potássio 1%, por 30
segundos, para evitar descoloração posterior.
Montar.