Biologia Molecular – QBQ3401 Química-Noturno 2009

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Biologia Molecular – QBQ3401 Química-Noturno 2009

Nome:

QUESTÕES:

1. Por que se observam duas bandas no plasmídeo que não foi incubado com a enzima?

2. Por que se utiliza EtBr (Brometo de Etídio) no gel e no tampão da eletroforese?

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QBQ-3401 / Biologia Molecular 2008

3. Géis de agarose podem ser usados para análise de fragmentos de DNA que tenham entre 70 e

800.000 pares de base. Assim, é possível estimar o tamanho e a quantidade dos fragmentos de DNA. O

tamanho pode ser estimado tomando-se por base a sua mobilidade em relação à de outros de tamanho

conhecido. Se o gel foi fotografado com uma régua ao lado, a mobilidade relativa pode ser lida

diretamente da foto. O gráfico da mobilidade em cm (M) contra o tamanho em pb (L) dará uma curva

que pode ser usada para leitura do tamanho com relação a uma determinada mobilidade. Entretanto, a

interpolação é muito mais precisa se a função puder ser encontrada em uma linha reta: gráfico de log L

versus M. Desenhe a reta utilizando papel monolog (eixo x, mobilidade em cm, eixo y, tamanho em

pb). Usando-se a mistura de padrões de tamanho em pb conhecida calcule o tamanho dos fragmentos

obtidos da digestão do pQBQ com as enzimas utilizadas. Faça um desenho do pQBQ indicando a

posição dos sítios de clivagem para estas enzimas.