Biologia Molecular – QBQ3401 Química-Noturno 2009

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Força iônica baixa ("Salting in") alta ("salting out) Meio ácido 0,5N (brando) à frio Meio alcalino brando (0,3N KOH; 37°C; 18h) Solvente orgânico (cte dieletr. < que da H 2 O) ex.: etanol, isopropanol Agentes desnaturantes que quebram pontes de H ex.: formamida, uréia Luz UV (260 nm) Calor Nucleases 38 QBQ-3401 / Biologia Molecular – 2008 PROPRIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DOS ÁCIDOS NUCLEICOS Solubiliza Precipita Precipita Despurina ss: estável ds: desnatura Precipita ss: estável ds: desnatura DNA RNA ss: absorve mais ds: absorve menos ss: estável ds: desnatura (T m ) Solubiliza Precipita Precipita Despurina Hidrolisa 2' e 3'nucleosídeos Precipita 1ária: estável 2ária: destruída Absorve 1ária: estável 2ária: destruída Exonucleases + + Endonucleases + +
ANTIBIÓTICOS INIBIDORES DE TRANSCRIÇÃO OU DE TRADUÇÃO 39 QBQ-3401 / Biologia Molecular – 2008 Rifamicina (Streptomyces) Rifampicina (sintética) Inibe iniciação da transcrição (impede a formação da la. ligação fosfódieser) mas não inibe elongação da cadeia de mRNA. Liga-se à subunidade β de RNAP. Actinomicina D: Estrutura: 2 peptídeos + 3 anéis benzeno fenoxazona (ver p 715 Stryer). Extraída de Streptomyces. Inibe transcrição. Liga-se a dsDNA impedindo que seja usado como template. Anéis fenoxazona intercalam-se entre as bases nitrogenadas do RNA. Usado em tratamento de câncer. α-Amanitina (octapeptídeo cíclico) de um cogumelo (Amanita) Inibe RNAPII (muito) e III (um pouco, em maior concentração). Liga-se a RNAPII bloqueando a formação de mRNA ou de precursores de mRNA. Inibe elongação. Puromicina: Inibe tradução. Análogo de aminoacil-tRNA. Liga-se ao sítio A do ribossomo, impedindo a entrada de aminoacil-tRNAS. Foma ligação peptídica com a cadeia polipeptídica nascente (peptidil transferase). Peptidilpuromicina: peptídeo liberado do ribossomo contendo puromicina ligada covalentemente ao Cterminal. Tetraciclina: Liga-se ao sítio A do ribossomo, impede ligação de aminoacil-tRNA neste sítio. Cloranfenicol: Só inibe a síntese de proteínas de procariotos e mitocôndira (não inibe a síntese protéica extramitocondrial de eucariotos). Cicloheximida: Inibe a formação dos ribossomos de eucariotos (80S), mas não de procariotos (70S). Estreptomicina: Causa leitura incorreta do código genético. TOXINAS Diftérica: Inibe síntese protéica. Alvo é EF 2 que cataliza a translocação do peptídeo. O fragmento A da toxina cataliza a transferência de ADP para EF2 (ADP-ribosilação) inativando este fator de elongação da cadeia polipeptídica. Ricina: Inativa a subunidade 60S dos ribossomos eucarióticos.
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