MICROBIOLOGIA DE OVOS COMERCIAIS - UFG

26Finalmente determina-se a confirmação preliminar das colôniastípicas: Com o uso de uma agulha de inoculação remove uma porção da massade células do centro de 3 colônias típicas de cada placa e inocula em tubosinclinados de ágar Tríplice Açúcar Ferro (TSI) que serão incubados a 35°C ± 2°por 24 horas.A aplicação da metodologia da reação em cadeia da polimerase(PCR) é uma técnica de Biologia Molecular que permite a detecção de umrápido diagnóstico da presença de bactéria em alimentos, animais e sereshumanos e é uma estratégia atualmente utilizada e citada por muitos autorescomo eficiente e com a vantagem de ser rápida, precisa, segura e diagnosticardoenças de forma mais precoce. No entanto, a análise é de alto custo, estandoatualmente em torno de R$ 20,00 a R$ 30,00 por amostra, sendo que énecessário adquirir o “primers” específico para cada tipo de bactéria e o valordo “primers” varia de R$ 400,00 a R$ 2.000,00 por kit. A análise de PCRconsiste nos seguintes passos: desnaturação, hibridização e extensão.O processo de desnaturação é realizado para separar a cadeiadupla de DNA em temperaturas elevadas, geralmente maior que 90 ºC;A hibridização não tem como objetivo da PCR replicar a cadeiainteira de DNA, mas apenas replicar a sequência de interesse que é única noorganismo. Temperatura hibridização normalmente encontra-se entre 40 ºC e65 ºC.A extensão inicia-se sempre no extremo 3’ do primer, criando umacadeia dupla a partir de cada uma das cadeias simples. A Taq polimerasesintetiza exclusivamente na direção 5’ para 3’.FLÔRES et al. (2003) estudaram duas técnicas (PCR e examebacteriológico convencional) de detecção de Salmonelas em ovos comerciais eobtiveram resultados semelhantes, havendo concordância de diagnóstico entreas metodologias para detecção de Salmonella em ovos. Todas as amostraspositivas ao bacteriológico foram também positivas nas análises com PCR.Apesar da reação em cadeia da polimerase (PCR) ser de alto custopara o produtor, ela possui vantagens por permitir a tipagem rápida de muitosmicrorganismos. Tornou-se ainda uma ferramenta valiosa na identificação eclassificação de bactérias.