AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA “IN VITRO” - CCS ...

- 43 -4.6.1 Preparação das soluções dos extratos:Num tubo plástico esterilizado com tampa preparou-se a solução mãe (SM)do extrato numa proporção de 1 mg do extrato bruto para cada 1 mL de DMSO(dimetil sulfóxido) sob constante vibração.Em seguida, prepararam-se as seguintes soluções:a. SM1 (Solução Mãe 1): transferiu-se 500 µL de SM para tubos deensaio esterilizados contendo 500 µL do meio BHI caldo (Bacto TM ,USA).b. SM2 (Solução Mãe 2): transferiu-se 500 µL de SM para tubos deensaio esterilizados contendo 2.500 µL do meio BHI caldo (Bacto TM ,USA).c. SM3 (Solução Mãe 3): transferiu-se 500 µL de SM para tubos deensaio esterilizados contendo 4.500 µL do meio BHI caldo (Bacto TM ,USA).Nesta fase avaliou-se o líquido difundido e enriquecido com os compostos doextrato da Punica granatum Linn.Para controle positivo foi utilizado o Digluconato de Clorexidina a 2% emdiluições seriadas.4.6.2 Preparação do inóculoApós contagem das colônias bacterianas das três cepas, padronizou-se onúmero de colônias de acordo com a escala de 0,5 de Mac Farland.A cepa identificada como M21Efg conteve inicialmente ~1, 6 x 10 8 UFCs,seguida das cepas M35Efa e M37e3 com ~ 6 x 10 8 e ~ 1,2 x 10 8 respectivamente.Os inóculos utilizados corresponderam às diluições citadas.4.6.3 Preparação das microplacasTodo o procedimento foi feito em capela de fluxo laminar e com vidrarias,ponteiras e meios de cultura previamente esterilizados e em quadruplicata. As