QUANTA Lite® R h-tTG IgA ELISA 704605 - inova
QUANTA Lite® R h-tTG IgA ELISA 704605 - inova
QUANTA Lite® R h-tTG IgA ELISA 704605 - inova
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
<strong>QUANTA</strong> <strong>Lite®</strong> R h-<strong>tTG</strong> <strong>IgA</strong> <strong>ELISA</strong> <strong>704605</strong><br />
För in vitro diagnostik<br />
CLIA-komplexitet: Hög<br />
Användningsområde<br />
Denna analys är avsedd för mätning in vitro av specifika <strong>IgA</strong>-autoantikroppar mot vävnadstransglutaminas (<strong>tTG</strong>) i<br />
humant serum, och som stöd vid diagnos av celiaki.<br />
Tillräckligt material medföljer för analys av högst 41 dubbelprover eller av 89 enkelprover med en kalibreringskurva<br />
och två kontroller.<br />
Sammanfattning och förklaring av analysen<br />
Celiaki karakteriseras av glutenintolerans som leder till ett kroniskt malabsorptionssyndrom på grund av<br />
inflammation i tunntarmens slemhinna och skada av epitelvävnaden 1 .<br />
De reviderade kriterierna för diagnos av celiaki, enligt The European Society for Paediatric Gastroenterology and<br />
Nutrition (ESPGAN) 1990, förutsätter identifiering av en enskild positiv tarmbiopsi tillsammans med förekomst av<br />
minst två av de tre <strong>IgA</strong>-autoantikropparna som beskrivs nedan.<br />
Autoantikroppar som är associerade med celiaki är: <strong>IgA</strong>-antikroppar mot endomysium 3 , IgG- och <strong>IgA</strong>-antikroppar<br />
mot gliadin 4 och retukulin.<br />
Flera studier visar att <strong>IgA</strong>-antikroppar mot endomysium analyser har över 99 % specificitet för celiaki och högre<br />
sensitivitet än anti-gliadin och anti-retikulin analyser<br />
<strong>ELISA</strong> för bestämning av <strong>IgA</strong>-antikroppar mot <strong>tTG</strong> är ett lämpligt alternativ till immunofluorescensanalyser (IFA) och<br />
lämpar sig synnerligen väl för såväl små- som storskalig screening 9,10 . Användning av rekombinant humant<br />
vävnadstransglutaminas som antigenkälla behandlas i referenserna 11 och 12.<br />
Analysprincip<br />
Mikrotiterbrunnarna är fördragerade med rekombinant humant <strong>tTG</strong>. Antigenet har framställts i Baculovirus celler<br />
med en cDNA-kod för den långa sammansatta isoformen av humant <strong>tTG</strong>.<br />
Kalibratorer, kontroller och spädda patientprover tillsätts i brunnarna och autoantikroppar med specificitet för <strong>tTG</strong><br />
binder till detta under den första inkuberingen. Brunnarna tvättas därefter för att avlägsna obundna antikroppar.<br />
Peroxidaskonjugerat get anti-humant <strong>IgA</strong> tillsätts. Konjugatet binder till den humana autoantikroppen och obundet<br />
konjugat avlägsnas sedan genom ytterligare en tvätt.<br />
Det bundna konjugatet görs synligt med 3,3’, 5,5’- tetrametylbensidinsubstrat (TMB), som ger en blå<br />
reaktionsprodukt. Färgintensiteten är proportionell mot koncentrationen av autoantikroppar i provet. Svavelsyra<br />
tillsätts i varje brunn för att avbryta reaktionen. Detta ger en gul ändpunktsfärg som avläses vid 450 nm.<br />
Reagenser<br />
1. Polystyren mikrotiterbrunn <strong>ELISA</strong>-platta täckt med rekombinant <strong>tTG</strong>-antigen (12-1 x 8 brunnar), med<br />
hållare i folieförpackning som innehåller desickanter.<br />
2. <strong>ELISA</strong> negativ kontroll, 1 flaska med buffert innehållande konserveringsmedel och humant serum utan<br />
några <strong>IgA</strong> humana antikroppar mot <strong>tTG</strong>, förspätt, 1,2 ml.<br />
3. R h-<strong>tTG</strong> <strong>IgA</strong> <strong>ELISA</strong> kalibrator A, 1 flaska med buffert innehållande konserveringsmedel och humant <strong>IgA</strong><br />
serumantikroppar mot <strong>tTG</strong>, förspätt, 1,2 ml.<br />
4. R h-<strong>tTG</strong> <strong>IgA</strong> <strong>ELISA</strong> kalibrator B, 1 flaska med buffert innehållande konserveringsmedel och humant <strong>IgA</strong><br />
serum antikroppar mot <strong>tTG</strong>, förspätt, 1,2 ml.<br />
5. R h-<strong>tTG</strong> <strong>IgA</strong> <strong>ELISA</strong> kalibrator C, 1 flaska med buffert innehållande konserveringsmedel och humant <strong>IgA</strong><br />
serum antikroppar mot <strong>tTG</strong>, förspätt, 1,2 ml.<br />
6. R h-<strong>tTG</strong> <strong>IgA</strong> <strong>ELISA</strong> kalibrator D, 1 flaska med buffert innehållande konserveringsmedel och humant <strong>IgA</strong><br />
serum antikroppar mot <strong>tTG</strong>, förspätt, 1,2 ml.<br />
7. R h-<strong>tTG</strong> <strong>IgA</strong> <strong>ELISA</strong> kalibrator E, 1 flaska med buffert innehållande konserveringsmedel och humant <strong>IgA</strong><br />
serum antikroppar mot <strong>tTG</strong>, förspätt, 1,2 ml.<br />
8. R h-<strong>tTG</strong> <strong>IgA</strong> positiv kontroll, 1 flaska med buffert innehållande konserveringsmedel och humant <strong>IgA</strong> serum<br />
antikroppar mot <strong>tTG</strong>, förspätt, 1,2 ml.<br />
9. HRP provutspädningsvätska, 2 flaskor – ljusröda, innehållande Tris-buffrad saltlösning, Tween 20,<br />
proteinstabiliserare och konserveringsmedel, 50 ml<br />
1
10. HRP tvättkoncentrat, 1 flaska med 40x koncentrat – rödfärgad innehållande Tris-buffrad saltlösning och<br />
Tween 20, 25 ml. Se avsnittet för Metoder för utspädningsinstruktioner.<br />
11. HRP R h-<strong>tTG</strong> <strong>IgA</strong> konjugat, anti-humant <strong>IgA</strong>, 1 flaska – gulfärgad innehållande buffert, proteinstabiliserare<br />
och konserveringsmedel, 10ml<br />
12. TMB Kromogen, 1 flaska innehållande stabiliserare, 10 ml<br />
13. HRP stopplösning, 0,344M svavelsyra, 1 flaska – färglös, 10 ml<br />
Varningar<br />
1. VARNING: Denna produkt innehåller ett kemiskt ämne (0,02 % kloramfenikol) i provlösningen, kontrollerna<br />
och konjugatet som i staten Kalifornien är känt att orsaka cancer.<br />
2. Allt humant källmaterial som används vid framställningen av kontroller för denna produkt har testats och<br />
befunnits negative gällande antikropp mot HIV, HBsAg och HCV med metoder som godkänts av FDA.<br />
Ingen testmetod kan emellertid garantera fullständig frånvaro av HIV, HCV eller annat smittämne. R h-<strong>tTG</strong><br />
<strong>IgA</strong> kontroll, R h-<strong>tTG</strong> <strong>IgA</strong> kalibratorer A till E och <strong>ELISA</strong> negativ kontroll bör därför hanteras på samma sätt<br />
som potentiellt smittsamt material. 14<br />
3. Natriumazid används som konserveringsmedel. Natriumazid är ett gift och kan vara toxiskt om det förtärs<br />
eller absorberas genom hud eller ögon. Natriumazid kan reagera med bly- eller kopparrör och bilda<br />
potentiellt explosiva metallazider. Om reagens hälls ut i vasker bör dessa spolas med stora mängder vatten<br />
för att förebygga anhopning av azid.<br />
4. HRP-konjugatet innehåller ett utspätt giftig/korroderande kemiskt ämne som kan vara toxiskt om det förtärs<br />
i stora mängder. För att förhindra eventuella kemiska brännskador bör kontakt med hud och ögon<br />
undvikas.<br />
5. TMB Kromogen innehåller ett irriterande ämne som kan vara skadligt om det inhaleras, förtärs eller<br />
absorberas genom huden. För att undvika skada bör inhalering, förtäring eller kontakt med hud och ögon<br />
undvikas.<br />
6. HRP-stopplösningen består av en utspädd svavelsyrelösning. Undvik exponering för baser, metaller eller<br />
andra föreningar som kan reagera med syror. Svavelsyra är ett gift och ett korroderande ämne som kan<br />
vara toxiskt om det förtärs. För att förhindra kemiska brännskador bör kontakt med hud och ögon undvikas.<br />
7. Använd lämplig personlig skyddsutrustning vid arbete med dessa reagenser.<br />
8. Spillda reagenser bör torkas upp omedelbart. Spill ska tas hand om i enlighet med vad federala, statliga<br />
och lokala miljöföreskrifter påbjuder.<br />
Försiktighetsåtgärder<br />
1. Denna produkt är avsedd att användas för in vitro-diagnostik.<br />
2. Denna produkt bör endast användas av personal med lämplig utbildning.<br />
3. Det rekommenderas att metodbeskrivningen följs noga. Avvikelser kan påverka analysprestanda och<br />
resultaten som fås. Lägg märke till särskilda ”Anm.” och varningar i metodbeskrivningen.<br />
4. Batchnummer av kalibrator, kontroll, konjugat och plattor är inte utbytbara. Utbyte av dessa komponenter<br />
mot komponenter med batchnummer som avviker från de som ingår i kitet kan leda till inkonsekventa och<br />
felaktiga resultat. Alla strips ska vara från samma folieförpackning.<br />
5. För att undvika kontaminering av reagens, använd endast nya eller rena plast/glaskärl. Häll aldrig tillbaka<br />
överblivet reagens i flaskorna.<br />
6. Låt aldrig reagensflaskor stå öppna; avdunstning eller kontamination som uppstår kan leda till felaktiga<br />
resultat.<br />
7. TMB kromogen får inte utsättas för ljus eller vatten.<br />
8. Mikrobt kontaminerade, hemolyserade eller lipemiska sera eller grumliga prover får inte användas ·<br />
9. Felaktig provspädning kan inte kontrolleras eftersom kontrollerna är färdigspädda. Kalibrerade pipetter<br />
samt lämplig intern kontroll rekommenderas.<br />
10. Användning av automatiserade analyssystem, provspädare och annan automatiserad utrustning kan ge<br />
skillnader i resultat vid jämförelse med manuella metoder. Varje laboratorium ansvarar för validering av<br />
systemet och säkerställande av att resultatet faller inom här angivna gränsvärden och åtföljande QC<br />
certifikat.<br />
11. All utrustning måste kalibreras och underhållas enligt tillverkarens instruktioner.<br />
2
Förvaringsförhållanden<br />
1. Kitet förvaras vid 2-8°C och får inte frysas. Felaktiga förvaringstemperaturer kommer att påverka<br />
resultatet.<br />
2. Spädd tvättbuffert är stabil under 1 vecka vid 2-8°C.<br />
3. Utgångsdatum visas på kitets yttre etikett.<br />
Provtagning<br />
1. Blodprover skall tas genom venpunktion och skall koagulera naturligt utan tillsatser. Serumet ska separeras.<br />
2. Serumet kan förvaras vid 2-8°C upp till 7 dagar före analys 13 eller vid längre förvaring, alikvoteras och<br />
förvaras vid -20°C eller lägre.<br />
3. Upprepad frysning och upptining bör undvikas.<br />
4. Serumprover får inte värmeaktiveras eftersom detta kan ge falska positiva resultat.<br />
Metod<br />
Material som ingår<br />
• Metodbeskrivning: Detaljerat analysprotokoll.<br />
• QC certifikat: Visar batchens förväntade prestanda.<br />
• Human Transglutaminase Coated Wells (Brunnar täckta med humant transglutaminas): Mikrotiterplatta<br />
med 12 delbara strips med 8 brunnar täckta med rekombinant <strong>tTG</strong>. Varje platta är förpackad i en<br />
återförslutningsbar folieförpackning med två desickanter.<br />
• HRP Sample Diluent (Spädningsvätska): 2 flaskor med vardera 50 ml buffert för provspädning (ljusröd<br />
färgkod). Färdig att användas.<br />
• HRP Wash Concentrate (Tvättbuffert): 1 flaska med 25 ml av 40x koncentrerad buffert för tvättning av<br />
brunnarna.<br />
• R h-<strong>tTG</strong> <strong>IgA</strong> Calibrators (Kalibratorer): 5 flaskor med vardera 1,2 ml spätt humant serum, med följande<br />
koncentrationer av <strong>IgA</strong> anti-<strong>tTG</strong> antikroppar:100; 33,3; 11,1; 3,7; 1,23 U/ml. . Färdiga att användas.<br />
• R h-tTg <strong>IgA</strong> Positive Control (Positiv kontroll): 1 flaska med 1,2 ml spätt humant serum. Förväntat värde<br />
finns angivet på QC certifikatet. Färdig att användas.<br />
• <strong>ELISA</strong>n Negative Control (Negativ kontroll): 1 flaska med 1,2 ml spätt humant serum. Förväntat värde<br />
finns angivet på QC certifikatet. Färdig att användas.<br />
• HRP R h-<strong>tTG</strong> <strong>IgA</strong> Conjugate (Konjugat): 1 flaska med 10 ml renad peroxidas-konjugerad antikropp mot<br />
humant <strong>IgA</strong> (gul färgkod). Färdig att användas.<br />
• TMB Chromogen (kromogen): 1 flaska med 10 ml TMB kromogen. Färdig att användas.<br />
• HRP Stop Solution (Stopplösning): 1 flaska med 10 ml 0,344 M svavelsyra. Färdig att användas.<br />
Ytterligare material som krävs men som inte medföljer<br />
• Automatisk tvätt för mikrotiterplattor: Rekommenderas, men tvätt av mikrotiterplattorna kan även göras<br />
manuellt.<br />
• Plattläsare: Med möjlighet att mäta vid 450 nm optisk densitet och med luft som referens.<br />
• Destillerat eller avjoniserat vatten: Detta skall vara av högsta möjliga kvalitet<br />
• Kalibrerade mikropipetter: För dispensering av 1000, 100 & 10 μl.<br />
• Multikanalspipett: Rekommenderas för att dispensera 100 μl volymer av konjugat, substrat och<br />
stopplösning.<br />
• Glas/plaströr: För provspädning.<br />
Metod<br />
Förberedande steg<br />
1. Låt kitet anta rumstemperatur<br />
• Kitet är avsett att användas vid rumstemperatur (20-24°C).<br />
• Ta ut kitet från förvaring och låt det stå i rumstemperatur ca 60 minuter. Brunnarna får inte tas ur<br />
foliekuvertet förrän de har antagit rumstemperatur. Anm. Kitet kan förvaras vid rumstemperatur upp till 1 vecka.<br />
2. Kitets komponenter Varje kitkomponent blandas varsamt före användning.<br />
3. Spädning av tvättbuffert Tillsätt 25 ml av tvättbuffertkoncentratet i 975 ml destillerat vatten (1 på 40<br />
spädning) i en ren behållare och blanda om. Anm. Spädd tvättbuffert kan förvaras vid 2-8°C i en vecka.<br />
Späd därför endast en lämplig mängd. Om bufferten uppvisar några tecken på mikrobiell kontamination<br />
eller blir grumlig, häll ut den och gör en färsk lösning.<br />
3
4. Provspädning<br />
Späd 10 μl av varje prov med 1000 μl provspädningsvätska (1:100) och blanda noga. Anm. Spätt prov<br />
måste användas inom 8 timmar.<br />
5. Hantering av ram och strips Placera önskat antal brunnar i striphållaren. Med start från brunn A1, fylls<br />
kolumnerna från vänster till höger över plattan. Vid hantering av plattan ska långsidorna pressas mot<br />
varandra för att förhindra att brunnarna faller ur. Anm. Lägg genast tillbaka oanvända brunnar i<br />
foliekuvertet med de två desickantpåsarna och tillslut ordentligt så att brunnarna inte utsätts för fukt. Var<br />
försiktig så att folien inte punkteras eller går sönder, se nedan. VARNING: Om brunnarna utsätts för fukt<br />
eller kontamineras med damm eller andra partiklar kan detta förorsaka nedbrytning av antigenet och<br />
därmed leda till dålig precision och potentiellt felaktiga resultat.<br />
Analysförfarande<br />
Bibehåll samma dispenseringssekvens genom hela analysen.<br />
1. Tillsats av prov Tillsätt 100 μl av varje kalibrator, kontroll och spätt (1:100) prov till respektive brunn i den<br />
medföljande plattan. Anm. Proven måste tillsättas till plattan så snabbt som möjligt för att minimera<br />
analysförskjutning, och timern ska startas efter tillsats av det sista provet. Inkubera vid rumstemperatur<br />
30 minuter.<br />
2. Tvätt<br />
Tvättproceduren är kritisk och kräver särskild uppmärksamhet. En felaktigt tvättad platta kommer att ge<br />
oriktiga resultat, med dålig precision och hög bakgrund. Efter inkubering ska plattan avlägsnas och tvättas<br />
3 gånger med 250-350 μl tvättbuffert per brunn. Tvätta plattan antingen med hjälp av en automatisk<br />
plattvätt eller manuellt enligt nedan. Efter den sista automattvätten, vänd plattan upp och ner och slå den<br />
torr mot ett absorberande papper.<br />
Plattorna kan tvättas manuellt enligt följande:<br />
a. Slå lätt till plattan och låt innehållet falla ner i ett tvättfat.<br />
b. Slå brunnarna torra mot ett absorberande papper.<br />
c. Fyll varje brunn med 250-300 μl tvättbuffert. Använd en multikanalspipett.<br />
d. Skaka plattan försiktigt på en plan yta.<br />
e. Repetera a-d två gånger.<br />
f. Repetera a och b<br />
3. Tillsats av konjugatet Tillsätt 100 μl konjugat i varje brunn, torka försiktigt runt brunnarna med en servett<br />
för att ta bort eventuella stänk. Anm. För att undvika kontamination får överblivet konjugat aldrig hällas<br />
tillbaka i reagensflaskan. Inkubera vid rumstemperatur under 30 minuter.<br />
4. Tvättning<br />
Upprepa steg 2.<br />
5. Tillsats av kromogen (TMB) Tillsätt 100 μl TMB kromogen i varje brunn, torka försiktigt runt brunnarna<br />
med en servett för att ta bort eventuella stänk. Anm. För att undvika kontamination får överblivet TMB<br />
aldrig hällas tillbaka i reagensflaskan. Inkubera vid rumstemperatur i mörker under 30 minuter.<br />
6. Stopplösning Tillsätt 100 μl stopplösning i varje brunn. Detta ger ett färgomslag från blått till gult.<br />
7. Mätning av optisk densitet Inom 30 minuter efter tillsats av stopplösning avläses den optiska densiteten<br />
(OD) vid 450 nm med en mikrotiterläsare.<br />
Kvalitetskontroll<br />
1. Kvalitetskontroll<br />
För att en analys ska vara godkänd måste följande kriterier uppfyllas:<br />
• Kalibratorer och positiva och negativa kontroller måste ingå i varje omgång.<br />
• De värden som fås för de positiva och negativa kontrollerna bör vara inom de angivna gränsvärdena<br />
som specificeras i QC-certifikatet.<br />
• Kurvans form bör likna kalibreringskurvan som visas i QC-certifikatet.<br />
Om de ovanstående kriterierna inte uppfylls är analysen ogiltig och bör göras om.<br />
2. Beräkna genomsnittlig optisk densitet (endast för analyser som görs som dubbelanalyser).<br />
Beräkna den genomsnittliga optiska densiteten för varje kalibrator, kontroll och prov vid avläsningarna av<br />
dubbelprov. Den procentuella variationskoefficienten (CV %) för varje duplikat OD bör vara lägre än 15 %.<br />
3. Plotta kalibreringskurvan Det går att plotta kalibreringskurvan antingen automatiskt eller manuellt på<br />
följande sätt: Plotta koncentrationen anti-tTg <strong>IgA</strong> antikroppar på den logaritmiska skalan mot den optiska<br />
densiteten (OD) på den linjära skalan för varje kalibrator: Automatiskt – använd lämplig godkänd<br />
programvara och den typ av kurva som bäst passar aktuella värden. Manuellt – använd rutat papper för<br />
logaritmiska och linjära skalor. Dra en följsam kurva genom punkterna (inte en rak linje eller från punkt till<br />
punkt).<br />
4
4. Behandling av avvikande punkter Om en enstaka punkt inte ligger på kurvan kan den tas bort. Om detta<br />
innebär att kurvans form inte längre liknar provkalibreringskurvan eller om flera punkter är avvikande bör<br />
analysen göras om.<br />
5. Beräkning av kontrollvärden Läs av mängden anti-tTg <strong>IgA</strong> antikroppar från kalibreringskurvan. Dessa<br />
värden bör falla inom de intervall som anges på QC-certifikatet.<br />
6. Beräkning av mängden autoantikroppar i spädda prover Läs av mängden anti-tTg <strong>IgA</strong> antikroppar i<br />
de spädda proverna direkt från kalibreringskurvan. Anm. Kalibreringsvärdena har justerats med en faktor<br />
på 100 för en provspädning på 1:100, vilket innebär att ytterligare omräkning inte behövs.<br />
7. Analyskalibrering Analysen är kalibrerad i U/ml mot en godtycklig referenskalibrator, eftersom ingen<br />
internationellt erkänd referenspreparation finns tillgänglig.<br />
Metodens begränsningar<br />
1. Detta kit används endast som stöd vid diagnostik av celiaki. Ett positivt resultat antyder vissa sjukdomar<br />
som måste bekräftas med kliniska undersökningar och andra serologiska tester.<br />
2. Resultaten från denna analys utgör inte en bekräftelse på om sjukdomen förekommer eller inte.<br />
3. Användning av denna analys har inte utvärderats med prover från barn.<br />
4. Ett negativt resultat kan bero på <strong>IgA</strong>-brist och utesluter inte förekomsten av celiaki.<br />
Förväntade värden<br />
Det normala området bestämdes utgående från 200 normala vuxna blodgivare. Ett av dessa prov bekräftades<br />
innehålla anti-tTg<strong>IgA</strong>-antikroppar.<br />
Områdena som ges är endast indikativa. <strong>ELISA</strong>-analyser är mycket känsliga och kan detektera små differenser i<br />
provpopulationer. Det rekommenderas att varje laboratorium bestämmer sitt eget normala område som grundar sig<br />
på de populationstekniker och den utrustning som används.<br />
TOLKNING AV RESULTAT<br />
Negativ 10 U/ml<br />
Prestandakarakteristika<br />
Precision<br />
Precisionen inom analysen mättes med sex prover inom kalibreringskurvans intervall. CV % för varje prov visas<br />
nedan:<br />
PRECISION INOM ANALYS<br />
n=20 Koncentration (U/ml) CV %<br />
Prov 1 2,8 2,8<br />
Prov 2 5,1 3,9<br />
Prov 3 15,8 1,9<br />
Prov 4 21,6 3,2<br />
Prov 5 29,4 5,5<br />
Prov 6 55,8 3,3<br />
Precisionen mellan analyser mättes med sex dubbelprover sex gånger i tre dagar. CV % för varje prov visas nedan:<br />
PRECISION MELLAN ANALYSER<br />
n=6 Koncentration (U/ml) CV %<br />
Prov 1 3,2 4,5<br />
Prov 2 5,3 5,8<br />
Prov 3 17,2 6,8<br />
Prov 4 25,2 7,1<br />
Prov 5 30,5 6,9<br />
Prov 6 74,0 6,7<br />
5
ANALYTISK SENSITIVITET<br />
Den analytiska sensitiviteten på 1,23 U/ml bekräftades med analys av två prover i multipla replikat med värden 1,5<br />
och 2,5 gånger det lägsta kalibreringsvärdet (1,23 U/ml). Statistisk analys enligt Student’s t test bekräftade att det<br />
var en signifikant skillnad mellan dessa prover (p
Analysens linjäritet<br />
Tre prover har analyserats för linjäritet tvärsöver kalibreringsområdet, regressionskoefficienten R 2 var större än<br />
0,997 vid jämförelse mellan faktiska och förväntade värden i U/ml, medelåtervinning var 99 %.<br />
Utvärdering av Prozon-effect<br />
Tre positiva prover späddes 1:6,25 i spädningsvätska (normal spädning 1:100) för att med överskott fastställa<br />
möjlig prozon-effekt. Alla prover späddes därefter på lämpligt sätt, inga falska negativa värden observerades vid<br />
lägsta provspädning, sålunda observerades ingen prozon-effekt.<br />
Plattans mall<br />
Se sista sidan i denna manual.<br />
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12<br />
A<br />
B<br />
C<br />
D<br />
E<br />
F<br />
G<br />
H<br />
Sammanfattning av proceduren<br />
1. Tillsätt 100μL av varje kalibrator, kontroll och 1:100 spätt prov i lämpliga brunnar.<br />
Inkubera i 30 minuter.<br />
Tvätta.<br />
2. Tillsätt 100μL konjugat i varje brunn.<br />
Inkubera i 30 minuter.<br />
Tvätta.<br />
3. Tillsätt 100μL substrat i varje brunn.<br />
Inkubera i 30 minuter.<br />
4. Tillsätt 100μL stopplösning i varje brunn.<br />
Mät absorbansen vid 450 nm.<br />
7
Referenser<br />
1. Trier, JS. Celiac Sprue. The New England Journal of Medicine 1991; 24: 1709-1719.<br />
2. Walker Smith J A et al. Revised criteria for the diagnosis of celiac disease: Report of working group of<br />
European Society of Pediatric Gastroenterology and Nutrition (ESPGAN). Arch Diseases of Childhood.<br />
1990;65: 909-911.<br />
3. Valdermarsson T et al. Is small bowel biopsy necessary in adults with suspected celiac disease and <strong>IgA</strong><br />
anti-endomysial antibodies. 100% positive predictive value for celiac disease in adults. Digestive Diseases<br />
and Science. 1996;41:83-87.<br />
4. Bürgin-Wolff et al. Antigliadin and antiendomysium antibody determination for coeliac disease. Archives of<br />
Disease in Childhood 1991; 66: 941-947<br />
5. Volta U et al. <strong>IgA</strong> anti-endomysial antibody test: A step forward in celiac disease screening. Digestive<br />
Diseases and Science. 1991;36:752-756.<br />
6. Grodzinsky E. Hed J, Skogh T. <strong>IgA</strong> anti-endomysial antibodies have a high predictive value for celiac<br />
disease in asymptomatic patients. Allergy. 1994:49:593-597.<br />
7. Dieterich W et al. Identification of tissue transglutaminase as the autoantigen of Celiac Disease. Nature<br />
Medicine. 1997; 3:797-801.<br />
8. Dieterich W et al. Autoantibodies to Tissue Transglutaminase as Predictors of Celiac Disease.<br />
Gastroenterology. 1998; 115:1317-1321.<br />
9. Sulkane S et al. Tissue Transglutaminase Autoantibody Enzyme linked Immunosorbent Assay in detecting<br />
Celiac Disease. Gastroenterology. 1998; 115:1322-1328.<br />
10. Sollid LM and Scott H. New tool to predict Celiac Disease on its Way to the Clinics. Gastroenterology.<br />
1998; 115:1584-1594.<br />
11. Sardy M et al . Recombinant Human Tissue Transglutaminase <strong>ELISA</strong> for the Diagnosis of Glutin-sensitive<br />
Enteropathy. Clin Chem. 1999; 45:12, 2142-2149.<br />
12. Sblattero D et al . Human recombinant Tissue Transglutaminase <strong>ELISA</strong>: An Inovative Diagnostic Assay for<br />
Celiac Disease. Ammeriacan Journal of Gastroenterology. 2000; 95:5, 1253-1257<br />
13. Protein Reference Unit Handbook of Autoimmunity (3rd Edition) 2004 Ed A Milford Ward. J. Sheldon, GD<br />
Wild. Publ. PRU Publications, Sheffield. 14.<br />
14. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Center for Disease Control/National Institute of<br />
Health, 2007, Fifth Edition.<br />
Tillverkad av:<br />
INOVA Diagnostics, Inc.<br />
9900 Old Grove Road<br />
San Diego, CA 92131<br />
United States of America<br />
Teknisk service (endast USA och Kanada): 877-829-4745<br />
Teknisk service (utanför USA): 00+ + 1 858-805-7950<br />
support@<strong>inova</strong>dx.com<br />
Auktoriserad representant inom EU:<br />
Medical Technology Promedt Consulting GmbH<br />
Altenhofstrasse 80<br />
D-66386 St. Ingbert, Germany<br />
Tel.: +49-6894-581020<br />
Fax.: +49-6894-581021<br />
www.mt-procons.com<br />
624605 SWE Augusti 2010<br />
Revision 0<br />
8