süleyman demirel üniversitesi tıp fakültesi hastanesinde izole

3.2. Virulans Özelliklerinin Test Edilmesi
3.2.1. Asit Proteinaz Deneyi
Candida suşlarının salgısal asit proteinaz aktivitelerini saptamak için %1 ‘lik
sığır serum albumin içeren katı besiyeri hazırlandı.
1 gr maya özütü, 2 gr pepton, 2gr dekstroz, 100 ml distile su karıştırılarak
YEPD (Yeast extract peptone dextrose) buyyon hazırlandı ve otoklavda 121 °C’de
15 dakika steril edildi.
2 gr dekstroz, 0,1 gr KH2PO4, 0,05 gr MgSO47H2O, 2 gr agar, 100 ml distile
su ile hazırlanan temel besiyeri otoklavda 110 °C’de 15 dakika steril edilerek, sitrik
asit çözeltisi ile pH 5‘e ayarlandı ve 50 °C’lik su banyosuna konuldu.
100 ml distile su ve 1 gr sığır serum albumininden oluşan karışım manyetik
karıştırıcıda çözüldükten sonra, 0,2 μm’lik membran filtreden geçirilerek steril edildi.
Hazırlanan protein çözeltisi, temel besiyerine %^20 oranında eklendi ve 90 mm çaplı
petri kaplarına 10'ar ml döküldü.
37 ºC’de 24- 48 saat inkübasyon sonrası SDA‘da üreyen maya kolonilerinden
YEPD buyyona pasaj yapılarak 30 ºC‘de 4 saat inkübe edildi. İnkübasyondan sonra
bulanıklık 0,5 McFarland’a ayarlandı ve 10 μl alınarak, katı besiyerine yerleştirilmiş
olan 6 mm çapındaki steril kağıt disklere damlatıldı. 30 ºC‘de 6 gün inkübasyon
sonrasında, disklerin çevresinde oluşan, besiyerindeki proteinin parçalandığını
gösteren erime zonlarının genişlikleri ölçülerek, proteolitik aktivitenin düzeyi
belirlendi. Erime zonu olmayan kökenler asit proteaz aktivitesi yönünden (-), erime
zonu diskin en fazla 1- 2 mm açığındaki alana yayılmış olan kökenler ılımlı (+),
erime zonu diskin 3- 5 mm açığındaki alana yayılmış olan kökenler ise kuvvetli (++)
olarak değerlendirilildi (96).
3.2.2. Fosfolipaz Deneyi
1,25 gr pepton, 2,5 gr glukoz, 2,5 gr agar, 7,3 gr NaCl, 0,14 gr CaCl26H2O,
115 ml distile su ile ana besiyeri hazırlandı ve otoklavda 121 °C’de 15 dakika steril
edilerek 50 °C’lik su banyosuna konuldu.
29