süleyman demirel üniversitesi tıp fakültesi hastanesinde izole
süleyman demirel üniversitesi tıp fakültesi hastanesinde izole
süleyman demirel üniversitesi tıp fakültesi hastanesinde izole
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
3.3.3. Mikroplağın Hazırlanması<br />
U tabanlı, 96 kuyucuklu steril mikroplağın her yatay sırası boyunca, ilk<br />
kuyucuk boş bırakılarak 11. kuyucuğa kadar 100 μL RPMI besiyeri konuldu. Maya<br />
inokülasyonu yapılmayacak olan 12. kuyucuklara, besiyeri sterilite kontrolü için 200<br />
μL RPMI konuldu. Çalışmaya başlamadan önce ilaç stok solüsyonları oda ısısına<br />
getirildi ve her biri RPMI besiyeri ile sulandırılarak 2x final konsantrasyonları<br />
hazırlandı. Flukonazol stok solüsyonundan, final konsantrasyonları 64-0.125 μg/mL<br />
olması için 128 μg/mL; amfoterisin B stok solüsyonundan, final konsantrasyonları<br />
16-0.03 μg/mL olması için 32 μg/mL; vorikonazol stok solüsyonundan, final<br />
konsantrasyonları 16-0.03 μg/mL olması için 32 μg/mL ve kaspofungin stok<br />
solüsyonundan, final konsantrasyonları 8-0.015 μg/mL olması için 16 μg/mL olacak<br />
şekilde final konsantrasyonlarının iki katı dilüsyonlar hazırlandı. Mikroplakların her<br />
sırasının boş bırakılmış olan ilk kuyucuklarına hazırlanmış olan 2x final<br />
konsantrasyonundaki antifungal solüsyonundan 200 μL kondu. Daha sonra ilk<br />
kuyucuktan başlayarak, 100 μL hacminde aktarımlarla 10. kuyucuğa kadar seri<br />
dilüsyon yapıldı. 11. ve 12. kuyucuklara ilaç solüsyonu konmadı. Bu şekilde plaklar,<br />
maya inokülasyonu için hazır hale gelmiş oldu.<br />
3.3.4. İnokülasyon İşlemi<br />
Suşların SDA besiyerindeki 24 saatlik kültürleri kullanıldı. Yaklaşık 1 mm<br />
çapında 5 tane koloni alınarak 5 mL steril serum fizyolojik içinde (% 0.85)<br />
süspanse edildi ve 15 saniye vortekslendi. Daha sonra steril serum fizyolojik<br />
kullanılarak bulanıklığı 0.5 McFarland değerine ayarlandı (yaklaşık 1 x 10 6 - 5 x 10 6<br />
hücre/mL). Bu süspansiyon RPMI besiyeri kullanılarak, önce 1/50 oranında, daha<br />
sonra tekrar 1/20 oranında sulandırıldı. Sonuçta maya stok süspansiyonu 1/1000<br />
oranında sulandırılmış ve 2x test inokülasyon konsantrasyonuna getirilmiş oldu (1 x<br />
10 3 - 5 x 10 3 hücre/mL). Mikroplak kuyucuklarına, 12. kontrol kuyucuğu hariç,<br />
1/1000 oranında sulandırılmış olan maya süspansiyonundan 100’er μl dağıtıldı.<br />
Böylece ilaçların konsantrasyonları final değerlerine ulaştı. Maya inokulumu da son<br />
konsantrasyonuna ulaşmış oldu (0.5 x 10 3 – 2.5 x 10 3 hücre/mL). Mikroplaklar<br />
alüminyum folyoya sarılarak 35°C’de inkübe edildi.<br />
32
Change language