süleyman demirel üniversitesi tıp fakültesi hastanesinde izole
süleyman demirel üniversitesi tıp fakültesi hastanesinde izole
süleyman demirel üniversitesi tıp fakültesi hastanesinde izole
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
Sulandırılmış çamaşır suyunda 1 dakika bekletildikten sonra steril gazlı bezle<br />
kurulanan yumurtalar steril koşullarda kırılarak sarısı steril bir şekilde ayrıldı.<br />
Yumurta sarısının üzerine eşit hacimde steril serum fizyolojik eklendi ve steril<br />
boncuklar bulunan bir balonda iyice karıştırıldı. Karışım 24 saat buzdolabında<br />
bekletildikten sonra steril cam tüplere alınarak 2000 rpm‘de 30 dakika santrifüj<br />
edildi. Santrifüj sonrası üst kısımdan alınan 10 ml sıvı ile 125 ml sitrik asit-<br />
disodyum fosfat tamponu, ana besiyerine eklendi ve karışım 90 mm çaplı petrilere<br />
10‘ar ml döküldü (97).<br />
37 ºC’de 18- 24 saat inkübasyon sonrası SDA‘da üreyen maya kolonilerinden<br />
steril serum fizyolojik kullanılarak 0,5 McFarland bulanıklığına göre süspansiyonlar<br />
hazırlandı. Her bir petriye bu süspansiyonlardan, ölçülü özeyle (0,001 ml) besiyeri<br />
yüzeyine değdirilmek suretiyle ekim yapılarak 37 ºC‘de 4 gün inkübe edildi.<br />
İnkübasyon sonrasında koloni çevresinde oluşan belirgin halka şeklindeki<br />
prespitasyon zonu (Pz) ölçülerek ve koloni çapının, koloni çapıyla presipitasyon<br />
zonunun çapının toplamına oranı hesaplanarak değerlendirildi (97).<br />
Koloni çapı<br />
Pz = ————————————————<br />
Koloni çapı + Presipitasyon zonu çapı<br />
Bu hesaplamaya göre, Pz = 1 değeri fosfolipaz aktivitesinin negatif olduğunu<br />
gösterir. Presipitasyon zonunun çapı arttıkça hesaplanan Pz değeri küçülecek ve<br />
fosfolipaz aktivitesi artacaktır. Çalışmamızda, Pz değeri 0,9 – 1,00 olanlar (+); 0,89 –<br />
0,8 olanlar (++); 0,79 – 0,7 olanlar (+++); < 0,69 olanlar (++++) olarak<br />
değerlendirildi (98).<br />
3.2.3. Biyofilm Deneyi<br />
Biyofilm üretimi için modifiye tüp aderans yöntemi kullanıldı. SDA‘da 24-<br />
48 saat inkübasyon sonrası oluşan kolonilerden bir öze dolusu alınarak, son glukoz<br />
konsantrasyonu % 8 olan Sabouraud buyyon(SB) içeren 10 ml’lik polistiren falkon<br />
tüplerine inoküle edildi ve 35 °C’de 48 saat inkübe edildi. İnkübasyon tamamlanınca<br />
tüplerin içerikleri boşaltılarak iki kez distile su ile yıkandı ve sonra %1‘lik safranin<br />
ile boyama yapıldı. Tüpler havada kurutulduktan sonra iç çeperde bulunan renkli<br />
30
Change language