In vitro Untersuchungen zur Wirkung von Phytopharmaka auf die ...

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38 Methoden Die Extinktion wurde daher im Biophotometer (Eppendorf, Hamburg) bei 595 nm gegen einen Leerwert gemessen. Mit dem Proteinstandard Rinderserumalbumin (BSA) [0,5-10 mg BSA/ml] wurde eine Eichgerade erstellt und zur Bestimmung der Proteinkonzentration in den Homogenaten verwendet. Berechnung der spezifischen Aktivität der GPx Zur Ermittlung der spezifischen Aktivität der GPx wurde die oben berechnete (Volumen-) Aktivität auf die Gesamt-Proteinkonzentration im Homogenat bezogen: ⎡mU⎤ Aktivität GPx ⎢ ⎣ ml ⎥ ⎦ ⎡mU⎤ =spezifischeAktivitätGPx ⎡mg⎤ ⎢ mg ⎥ Gesamtproteinkonz. ⎣ ⎦ ⎢ ⎣ml ⎥ ⎦ Die Ergebnisse der Messung der spezifischen Aktivität der Glutathionperoxidase in Proben des Ileums, der Leber sowie in hämolysierten Erythrozyten der GPx1-KO-Maus und der WT-Maus werden in Tab. 6 gezeigt. Es ist erkennbar, dass die spezifische Aktivität der GPx in den Geweben der WT-Maus signifikant höher war: In Ileum- und Leber-Präparaten war die Aktivität um den Faktor 3 und in den Erythrozyten um den Faktor 1,5 erhöht. Bei den KO-Tieren ist speziell nur die GPx-1 defizient, weshalb immer noch eine Rest-Aktivität der GPx in den Organen dieser Mäuse gemessen werden konnte. Spezifische Aktivität der GPx [mU/mg] WT-Maus n GPx1-KO-Maus n Ileum 1,32 ± 0,7 5 0,38 ± 0,17 5 Leber 27,03 ± 6,1 7 8,59 ± 6,2 9 Erythrozyten 6,92 ± 0,7 6 4,82 ± 0,9 10 Tab. 6: Spezifische Aktivität der GPx im Ileum, in der Leber und in Erythrozyten der WT- und der GPx-KO-Maus. Angegeben sind die Mittelwerte ± Standardabweichung in mU/mg. n = Anzahl der untersuchten Tiere.
3.4 Statistik Methoden 39 Die statistische Auswertung der Versuche erfolgte mit dem Programm WINSTAT für Excel. Unter Annahme der Normalverteilung wurden Mittelwertsvergleiche zwischen den Messwerten vor und nach Applikation der verwendeten Lösungen an gleichen Präparaten mittels t-Test für abhängige Stichproben gerechnet. Mittelwertsvergleiche zwischen der Gruppe der GPx1-KO-Präparate und derjenigen der WT-Präparate erfolgten mittels zweiseitigem t-Test für unabhängige Stichproben. Das Signifikanzniveau wurde auf p < 0,05 festgelegt, genauere Angaben finden sich im Ergebnisteil.
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