Untersuchungen zum Überflussmetabolismus in Escherichia coli

Ergebnisse 55
Das Wachstum des Stammes MG1655∆Psdh::Ptet (pTrc99a gfp uv ) und des Wildtyps MG1655
(pTrc99a gfp uv ) bei Kultivierung in Minimalmedium mit 10 mM Glucose bzw. LB-Medium mit
100 mM Glucose und Überexpression des GFP-Proteins ist vergleichbar mit den
Kultivierungen, bei denen die Stämme keine Überexpressionsplasmide enthielten (vgl.
Wachstumskurven in Abschnitt 1.2.1.1.). Die beiden Stämme wuchsen unter den gewählten
Kultivierungsbedingungen jeweils mit der gleichen Rate, wie anhand der Wachstumsraten in
den Tabellen 9 und 10 zu erkennen ist. Bei Kultivierung in LB-Medium mit 100 mM Glucose
bildetet die Mutante MG1655∆Psdh::Ptet mehr Biomasse als der Wildtyp (s. Tab. 9 und 10).
Tab. 9: Wachstum und Acetatbildung der Stämme MG1655 WT und MG1655∆Psdh::Ptet bei
Überexpression des GFP-Proteins in LB-Medium + 100 mM Glucose im Schüttelkolben
Wachstumsrate Biomasse Acetat
Stamm µ [h -1 ] [∆ OD 600 ] [mM]
MG1655 WT(pTrc99a gfp uv ) 1,50 8,2 37
MG1655∆Psdh::Ptet (pTrc99a gfp uv ) 1,45 11,2 4
Tab. 10: Wachstum und Acetatbildung der Stämme MG1655 WT und MG1655∆Psdh::Ptet
bei Überexpression des GFP-Proteins in Minimalmedium + 10 mM Glucose im Schüttelkolben
Wachstumsrate Biomasse Acetat
Stamm µ [h -1 ] [∆ OD 600 ] [mM]
MG1655 WT(pTrc99a gfp uv ) 0,64 2,25 2
MG1655∆Psdh::Ptet (pTrc99a gfp uv ) 0,56 2,01 1
Um die rekombinante Proteinproduktion der Stämme zu bestimmen und zu vergleichen,
wurden während der exponentiellen bzw. exponentiellen und stationären Wachstumsphase
Proben entnommen und die Fluoreszenz der Zellen bestimmt. Ein Zellaufschluss war dazu
nicht erforderlich. Die ermittelten Fluoreszenzintensitäten wurden in Relation zur Zellzahl
gesetzt (normierte, relative Fluoreszenzintensität), welche zuvor mit Hilfe eines Coulter-