NOVA LiteTM F-Actin Rat Epithelial - inova

Qualitätskontrolle
Die IgG F-Actin Positivkontrolle und IFA-System Negativkontrolle sollten auf jedem Objektträger
mitgeführt werden, um sicherzustellen, dass alle Reagenzien und Arbeitsschritte richtig
ausgeführt wurden. Geeignete zusätzliche Kontrollseren können mittels Aliquotierung gepoolter
Humanserumproben gewonnen und bei < -70 o C gelagert werden. Die Testergebnisse gelten als
gültig, wenn alle nachstehend aufgelisteten Kriterien erfüllt wurden. Wurde eines dieser Kriterien
nicht erfüllt, so müssen das Testergebnis als ungültig angesehen und der Test wiederholt
werden.
1. Die unverdünnte F-Actin-IgG-Antikörper Positivkontrolle muss > 3+ sein.
2. Die IFA-System Negativkontrolle muss negativ sein.
Interpretation der Ergebnisse
Negative Reaktion: Eine Probe gilt als negativ, wenn die spezifische Färbung (siehe
Beschreibung unter „Positive Reaktion“ gleich wie oder weniger als die IFA-System
Negativkontrolle ist. Proben können verschiedene Stufen einer spezifischen Färbung bzw.
Hintergrundfärbung anderer Zellkomponenten aufweisen, jedoch negativ für Anti-F-Actin-IgG-
Antikörper sein.
Positive Reaktion: Eine Probe gilt als positiv, wenn sich eine spezifische Färbung mit größerer
Intensität als die IFA-System Negativkontrolle auf den F-Actin-Fasern um den Großteil der
Zellen herum in einem hexagonalen Muster und zuweilen auf den Fasern über Zellen
beobachten lässt.
Bestimmen Sie den Grad bzw. die Intensität der Fluoreszenz anhand folgender Kriterien:
4+ Grelle apfelgrüne Fluoreszenz
3+ Helle apfelgrüne Fluoreszenz
2+ Deutlich erkennbare positive Fluoreszenz
1+ Niedrigste spezifische Fluoreszenz, die eine deutliche Differenzierung der F-Actin-
Färbung von der Hintergrundfluoreszenz ermöglicht.
Auswertung des Musters: Je nach Art und relativer Anzahl der in der Probe vorhandenen
Antikörper lassen sich verschiedene Muster nukleärer und/oder zytoplasmatischer Färbung
feststellen. Es sollte nur das oben unter „Positive Reaktion“ beschriebene Muster als positiv für
Anti-F-Actin-IgG-Antikörper gewertet werden. Alle anderen Muster sind als negativ zu werten.
Grenzen des Verfahrens
1. Ein Anti-F-Actin-IgG-Muster mit hohem Titer weist auf AIH hin, sollte jedoch nicht als
diagnostisch gewertet werden. Das Anti-F-Actin-IgG-Ergebnis ist gemeinsam mit anderen
Laborbefunden sowie der Anamnese des Patienten zu betrachten.
2. Die Testsensitivität wird von einer Reihe externer Faktoren beeinflusst, u.a. die Art des
verwendeten Fluoreszenzmikroskops, Stärke und Alter der Lichtquelle, verwendete
Vergrößerung, Filtersystem und Erfahrung des Anwenders.
3. Wird anstelle des 515nm-Sperrfilters ein Bandpassfilter verwendet, kommt es
möglicherweise zu verstärkter Artefaktbildung.
4. Zur Beschriftung der Objektträger sollte ausschließlich ein Bleistift verwendet werden. Bei
Verwendung anderer Schreibutensilien können Artefakte entstehen.
5. Alle zum Waschen der Objektträger verwendeten Coplin-Gefäße müssen frei von
jeglichen Farbstoffrückständen sein. Bei Verwendung von Coplin-Gefäßen mit
Farbstoffrückständen können Artefakte entstehen.
6. Die Leistungsdaten des Tests wurden ausschließlich für Serum bestimmt und nicht für
Plasma oder andere Probenarten.
Erwartungswerte
Die Eignung des NOVA Lite TM IgG F-Actin für den Nachweis von F-Actin-IgG-Antikörpern wurde
anhand des Vergleichs mit dem im Handel erhältlichen QUANTA Lite TM F-Actin IgG ELISA
(INOVA Diagnostics, Inc) beurteilt. Die ELISA-Ergebnisse wurden als positiv bestätigt, wenn die
Patientenprobe > Einheiten betrug und als negativ, wenn sie < als 20 Einheiten betrug.
Normalbereich
493 Proben von normalen Blutspendern wurden mit dem NOVA Lite TM IgG F-Actin getestet. Mit
Ausnahme von 4 Proben lieferten alle der 493 normalen Proben (Spezifität 99,2%) ein
negatives Ergebnis beim NOVA Lite TM IgG F-Actin.
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