F1- Praktikum Mikrobiologie Block N: Molekulare mikrobielle Ökologie

Begleitflora eliminiert werden. Durch Zusatz von Antibiotika zu den Nährböden z.B.
Vancomycin und Polymyxin B können die meisten Gram-positiven Bakterien
(Staphylokokken, Enterokokken) und Gram-negativen Bakterien (Polymyxin B,
insbesondere Pseudomonas) in ihrem Wachstum gehemmt werden. Als einen
weiteren Selektionsmechanismus macht man sich die Toleranz der Legionellen
gegen niedrige pH-Werte zu Nutze (pH 2.2).
Das Wachstumsoptimum der Legionellen liegt bei 37°C mit 5% CO 2 -Begasung. Die
Legionellen erscheinen nach 2-3 tägiger Bebrütung als weiß-bläulich gefärbte
Kolonien auf den BCYE-Agarplatten. Mikroskopisch erscheinen die Legionellen als
nicht filamentöse, monopolar begeißelte, Stäbchen. Einige Legionella-Spezies sind in
der Lage, hämolytisch aktive Proteine zu synthetisieren, die humane Erythrozyten
lysieren. Ein weiteres Erkennungsmerkmal ist die Sekretion eines braunen Pigments
in der stationären Wachstumsphase.
Versuchsbeschreibung:
- Isolierung von Legionellen aus Mainwasser durch Filtration und
Säurewaschung
- Auswertung der kultivierbaren mikrobiellen Diversität
- Antibiotikaresistenzassay zur Überprüfung des Resistenzprofils
- Hemmhofassays zur Identifizierung von Keimen mit antimikrobieller Aktivität
2.1 Isolierung von Legionellen aus der Umwelt
Filtration (am Montag)
Es werden verschiedene Wasserproben verwendet. Von jeder Probe (+ eine
Positivkontrolle) werden 100 ml durch einen vorgeweichten Bakterienfilter
(Porengröße 0,2 um) unter Vakuum filtriert. Die Bakterien werden aufgrund der
Porengröße der Membran auf dem Filter zurückgehalten. Die ersten Filter werden auf
1 BCYE (Polymyxin +Vancomycin), 1 BCYE (ohne Antibiotikum), 1 Blut-Agarplatten
aufgelegt und bei 37°C, 5% CO 2 inkubiert. Nach etwa 3 Tagen können die Platten
ausgewertet werden. Die übrigen Filter werden einer Säurewaschung unterzogen.
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