F1- Praktikum Mikrobiologie Block N: Molekulare mikrobielle Ökologie

2.2 Antibiotikaresistenzbestimmung
Ziel: In diesem Versuch sollen Sie die Antibiotikaempfindlichkeit von Staphylokokken
mit Hilfe des Agar-Diffusionstestes feststellen.
Einleitung:
Seit etwa 50 Jahren hat die richtige und rechtzeitige Anwendung von Antibiotika in
der Human- und Veterinärmedizin vielen schweren Infektionskrankheiten wie
bakteriellen Hirnhautentzündungen, Lungenentzündungen, Tuberkulose, Diphtherie,
Scharlach, Harnwegsentzündungen, Abszessen ihren Schrecken genommen.
Den positiven Erfahrungen mit Antibiotika steht eine von den Mikrobiologen schon
bald beobachtete negative Entwicklung gegenüber: die zunehmende Auslese,
Anreicherung und Ausbreitung resistenter Keime, die auf eine Antibiotikabehandlung
nicht mehr ansprechen.
Viele Bakterien haben durch Mutationen mehrere Wege entdeckt, um ein
Antibiotikum unwirksam zu machen oder ihm zu entgehen:
• Das Antibiotikum-Molekül wird von den Bakterien chemisch-enzymatisch unwirksam
gemacht (z.B b-Lactamasen, Aminoglykosid-Phosphorylasen,
Acetyltransferasen, Adenylyltransferasen etc.).
• Die Bakterienzellen machen ihre Zellwand undurchlässig für das Antibiotikum
• Die Bakterienzellen scheiden eindringendes Antibiotikum wieder aus, bevor es
Schaden anrichten kann (z.B. mit in den Membranen vorkommenden
Effluxsystemen) und
• die Bakterien panzern sich durch genetische Veränderungen (Mutationen) der
Angriffspunkte (Targets) gegen den Angriff eines Antibiotikums.
Die Stämme werden in Müller-Hinton-Medium angeimpft und über Nacht im Schüttler
bei 37°C angezogen. Die Kultur wird mit frischem Medium verdünnt und 1 Stunde bei
37°C wachsen gelassen (~ McFarland-Standard 0,5). Dies entspricht einer Keimzahl
von 10 5 -10 6 Zellen/ ml. Von dieser Verdünnung werden 150 µl auf eine Müller-
Hinton-Agarplatte ausplattiert. Anschließend werden mit Hilfe einer Pinzette
Antibiotikatestplättchen auf die Platte aufgelegt und bei 37 °C über Nacht im
Brutschrank inkubiert. Am nächsten Tag erfolgt die Auswertung des Tests durch
Ausmessen der Hemmhofdurchmesser.
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