Modulatoren der Hyaluronsäurematrix im Rahmen der extrinsischen ...

Weitere Magazine

Empfehlungen

Info

6 MATERIAL UND METHODEN
6.1 ZELLVERSUCHE 6.1.1 ZELLKULTUR Material und Methoden Humane, dermale Fibroblasten von weiblichen und männlichen Spendern (Promocell, Heidelberg) wurden in Dulbecco’s modified Eagle’s Medium (DMEM, Sigma Steinheim), welches mit 10% hitzeinaktiviertem, fetalem Kälberserum (FKS, Pan Biotech, Aidenbach), 2 mmol/l Glutamin (Invitrogen, Karlsruhe) und Antibiotika (100 Einheiten/ml Penicillin, 50 mg/ml Streptomycin-G, Invitrogen, Karlsruhe) versetzt wurde, kultiviert. Die Untersuchungen zum Einfluss von Estradiol wurden mit DMEM ohne Zusatz von Phenolrot (Sigma, Steinheim) und mit Aktivkohle behandeltem FKS durchgeführt. Die Zellen wurden als subkonfluenter Monolayer bei 37°C und 5% CO2 in feuchter Atmosphäre gehalten. Zum weiteren Passagieren wurden die Zellen mit PBS (Dako, Hamburg) gewaschen und durch Inkubation mit Trypsin/EDTA (Biochrom, Berlin) von der Kulturschale gelöst. Die Trypsinierung wurde nach 5 Minuten durch die Zugabe einer äquivalenten Menge DMEM mit 10% FKS abgestoppt und die Zellsuspension bei 1.000 rpm zentrifugiert. Nach dem Verwerfen des Überstandes wurde das Zellpellet in frischem Medium resuspendiert und die Anzahl der lebensfähigen Zellen mit Hilfe eine Neubauer Zählkammer bestimmt. Für weitere Versuche wurden die Zellen mit einer Dichte von 5.000 Zellen/cm² Kulturschale ausgesät. Die Bestimmung der [³H]–Thymidin-Inkorporation, Affinitäts- und Immunozytochemie erfolgte bei einer Zelldichte von 3.000 Zellen/cm². Normale humane epidermale Keratinozyten (NHEK, PromoCell, Heidelberg) wurden in Keratinocyte Growth Medium 2 (PromoCell, Heidelberg), welches mit 0,06 mM CaCl2, 2 mmol/ L-Glutamin und Antibiotika (100 Einheiten/ml Penicillin, 50 mg/ml Streptomycin-G, Invitrogen, Karlsruhe) versetzt wurde, kultiviert. Falls nicht anders im Text vermerkt, wurden die Zellen 24 Stunden nach der Aussaat für 24 Stunden durch Serumentzug synchronisiert und anschließend für weitere 24 Stunden mit den in Tabelle 1 dargestellten Stoffen stimuliert. S e i t e | 23
Seite 1 und 2: Modulatoren der Hyaluronsäurematri
Seite 3 und 4: 1 INHALTSVERZEICHNIS Inhaltsverzeic
Seite 5 und 6: Inhaltsverzeichnis 7.2 POSITIVE MOD
Seite 7 und 8: 2 ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS AK Antikö
Seite 9 und 10: 3 ABBILDUNGSVERZEICHNIS Abbildungsv
Seite 11 und 12: 40 Einfluss von konditionierten Ker
Seite 13 und 14: 5 EINLEITUNG
Seite 15 und 16: 5.1.1 HYALURONSÄURE Einleitung HA,
Seite 17 und 18: 5.2.1.1 DIE ROLLE VON ESTRADIOL IM
Seite 19 und 20: Einleitung 5.2.2.1 ALTERUNGSBEDINGT
Seite 21: 5.3 ZIELSETZUNG Einleitung Die Erh
Seite 25 und 26: 6.1.3 3-D KULTUREN Material und Met
Seite 27 und 28: 6.2.2 OPERATIVE ENTFERNUNG DER EIER
Seite 29 und 30: Material und Methoden Steinheim) mi
Seite 31 und 32: 6.9 AFFINITÄTSZYTOCHEMIE Material
Seite 33 und 34: Tabelle 3 Verwendete Antikörper un
Seite 35 und 36: 6.14 SDS-PAGE 6.14.1 PROTEINE Mater
Seite 37 und 38: 6.16 FACS (FLUORESCENT ACTIVATED CE
Seite 39 und 40: 7 ERGEBNISSE
Seite 41 und 42: Ergebnisse In dermalen Fibroblasten
Seite 43 und 44: Ergebnisse Die Untersuchung der rel
Seite 45 und 46: Ergebnisse KF verursachten einen pa
Seite 47 und 48: Ergebnisse Abbildung 16 Zeitliche K
Seite 49 und 50: Ergebnisse Zusammenfassend kann ges
Seite 51 und 52: Ergebnisse Abbildung 21 UVB-induzie
Seite 53 und 54: Ergebnisse Im Anschluss sollte unte
Seite 55 und 56: 7.2 POSITIVE MODULATION DER HA-MATR
Seite 57 und 58: 7.2.2 MRNA-REGULATION VON HA-ASSOZI
Seite 59 und 60: Ergebnisse Neben Quantifizierung de
Seite 61 und 62: Ergebnisse 7.2.4 E2 UND UVB FÜHREN
Seite 63 und 64: Ergebnisse Zur Überprüfung der an
Seite 65 und 66: Ergebnisse 7.2.6 DIE DURCH E2 VERMI
Seite 67 und 68: Ergebnisse Zur Untersuchung dieser
Seite 69 und 70: Ergebnisse Abbildung 39 Einfluss vo
Seite 71 und 72: Ergebnisse 7.2.7 DIFFERENZIELLE EFF
Seite 73 und 74:
Ergebnisse 7.2.8 DIFFERENZIELLE EFF
Seite 75 und 76:
Ergebnisse Abbildung 47 Expression
Seite 77 und 78:
8.1 NEGATIVE MODULATION DER HA-MATR
Seite 79 und 80:
Diskussion [113]. Die Verwendung vo
Seite 81 und 82:
Diskussion unterschiedlichen Inhibi
Seite 83 und 84:
Diskussion Aus diesem Grund wurde i
Seite 85 und 86:
Diskussion biologischen System zu s
Seite 87 und 88:
8.3 AUSBLICK Diskussion In der vorl
Seite 89 und 90:
10 SUMMARY Summary Extrinsically ag
Seite 91 und 92:
Literaturverzeichnis 21. DE LA MOTT
Seite 93 und 94:
Literaturverzeichnis 69. PUNNONEN,
Seite 95 und 96:
Literaturverzeichnis 120. WIGGIN, G
Seite 97 und 98:
12.1.7 RIPA 50mM Tris-HCl pH 7.4 15
Seite 99 und 100:
humanes Versican V1 humanes Versica
Seite 101 und 102:
13 DANKSAGUNG Danksagung Mein herzl
Seite 103 und 104:
Lebenslauf Der Lebenslauf ist in de
Seite 105 und 106:
14.1.3 VERÖFFENTLICHTE KONGRESSBEI
Seite 107 und 108:
collagen fragmentation and loss of
Seite 109 und 110:
shown),hintingtowardinvolvementofHA
Seite 111 und 112:
sure(Fig.6C).NotablythedeclineofHAS
Seite 113 und 114:
the present data on signaling are c
Seite 115 und 116:
Estradiol Protects Dermal Hyalurona
Seite 117 und 118:
Estradiol Protects Hyaluronan/Versi
Seite 119 und 120:
Seite 121 und 122:
Seite 123 und 124:
Seite 125 und 126:
Seite 127 und 128:
Seite 129:
15 EIDESSTATTLICHE ERKLÄRUNG Erkl
Alle anzeigen

Modulatoren der Hyaluronsäurematrix im Rahmen der extrinsischen ...

Erfolgreiche ePaper selbst erstellen

Template löschen?

Als Template speichern?