Modulatoren der Hyaluronsäurematrix im Rahmen der extrinsischen ...
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Tabelle 1 In <strong>der</strong> Zellkultur verwendete St<strong>im</strong>ulantien und Konzentrationen.<br />
Material und Methoden<br />
Stoffname Firma Eingesetzte<br />
Anisomycin (p38 Aktivator) Sigma, Steinhe<strong>im</strong> 10 µM<br />
Konzentration<br />
EGF neutralisieren<strong>der</strong> Antikörper Abcam, Cambridge, UK 0,35 µg/ml<br />
Epi<strong>der</strong>mal growth factor Sigma, Steinhe<strong>im</strong> 10 µM<br />
Erlotinib LC Laboratories, Woburn,<br />
USA<br />
3 µM<br />
Estradiol (E2) Sigma, Steinhe<strong>im</strong> 100 nM<br />
IgG Isotyp Kontrollantikörper<br />
(LM609)<br />
IgG Isotyp Kontrollantikörper<br />
(EGF)<br />
Millipore, Schwalbach 5 µg/ml<br />
Abcam, Cambridge, UK 0,35 µg/ml<br />
Latrunculin A Sigma, Steinhe<strong>im</strong> 3 &10 µM<br />
Lysophosphatidische Säure (LPS,<br />
Rock Aktivator)<br />
Sigma, Steinhe<strong>im</strong> 300 nM<br />
MMP Inhibitor I Sigma, Steinhe<strong>im</strong> 300 mM<br />
PD98059? Merck, Darmstadt 1 µM<br />
RGDS Peptides International,<br />
Louisville, USA<br />
10 µg/ml<br />
SB203580 (p38 Inhibitor) Merck, Darmstadt 1 µM<br />
SP 6000125 (JNK Inhibitor) Sigma, Steinhe<strong>im</strong> 10 µM<br />
Y27632 (Rock Inhibitor) Sigma, Steinhe<strong>im</strong> 10 µM<br />
αvβ3 blockieren<strong>der</strong> Antikörper<br />
(LM609)<br />
6.1.2 HERSTELLUNG DER KOLLAGENFRAGMENTE<br />
Millipore, Schwalbach 5 µg/ml<br />
Typ 1 Kollagengele wurden wie folgt hergestellt [114]. Kollagenlösung (1 ml) (PureCol ® ,<br />
Advanced Biomatrix, San Diego, USA, 3,0 mg/ml aus boviner Haut gewonnenes Kollagen<br />
Typ 1) wurde in einer d35er Schale mit 460 µl 7-fach DMEM (Invitrogen, Darmstadt) und<br />
1,54 ml steril filtriertem Wasser neutralisiert und bei 37°C für 24 Stunden bis zur<br />
vollständigen Polymerisation <strong>im</strong> Brutschrank inkubiert. Zur Spaltung des Kollagens in KF,<br />
wurde das polymerisierte Gel mit 2 mg/ml Kollagenase 3 (Worthington, Lakewood, USA) bei<br />
37°C für 30 Minuten verdaut. Die Kollagenaseaktivität wurde anschließend durch die Zugabe<br />
eines äquivalenten Volumens DMEM mit 10% FKS inhibiert und die Lösung auf eine<br />
Endkonzentration von 125 µg/ml KF mit DMEM verdünnt.<br />
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