nukleosidanaloger Reverse Transkriptase Hemmer - repOSitorium ...

Theoretische Grundlagen
In der Phase-I-Reaktion wird die Substanz chemisch soweit verändert, dass
funktionelle Gruppen innerhalb des Moleküls entstehen, die eine anschließende
Reaktion in der Phase II ermöglichen. Die entstandenen Metabolite werden in der
Phase-II-Reaktion mit körpereigenen Substanzen gekoppelt (durch Transferasen
aus dem Intermediärstoffwechsel übertragene Stoffe), dadurch stärker
wasserlöslich und somit renal besser ausscheidbar (WEHKING-BRÖKER 2000). Für
einige Substanzklassen kann Phase II auch zur Bildung von Mutagenen führen
(MILLER 1994; GIBSON & SKETT 1994).
Um in vitro eine metabolische Aktivierung zu erhalten, wurden verschiedene
Ansätze verfolgt. Besonders in Bakterien-Mutagenitätstests wurden Arochlor
1254-induzierte Rattenleber-Microsomen-Aufbereitungen (S9 Mix) oder genetisch
manipulierte Säugerzelllinien, die CYP450 cDNA aus der Rattenleber oder
humane CYP450 cDNA, verwendet (AMES et al. 1975; CROFTON-SLEIGH et al. 1993).
Die letzteren beiden werden für die in-vitro-Micronucleustestung herangezogen.
Aufgrund ihrer hohen Metabolisierungskapazität bezüglich Xenobiotica finden
hauptsächlich Zellkulturen von Hepatocyten eine weit verbreitete Anwendung
(BLAAUBOER et al. 1994; MÜLLER-TEGETHOFF et al. 1995).
Im Gegensatz zu Säugerembryonen entwickeln Vogelembryonen schon in frühen
embryonalen Phasen eine große Bandbreite an metabolischen Aktivitäten, was
unter Umständen mit der frühen Differenzierung der Leber und der relativen
Autonomie von Vogelembryonen zusammenhängt (SINCLAIR & SINCLAIR 1992).
Die Isozyme des CYP-450-Systems, sowie deren Induktion in der embryonalen
Leber, dem gesamten Embryo, primären Zellkulturen oder dem Dottersack
während unterschiedlicher Entwicklungsstadien (HEINRICH-HIRSCH 1990), als auch
die Phase-II-Reaktionen wurden von mehreren Autoren ausführlich untersucht.
Hierbei konnten Reaktionen wie die Glucoronidierung (BANJO & NEMETH 1976;
JACKSON et al. 1986), Sulfatierung (SPENCER & RAFTERY 1966), Methylierung
(IGNARRO & SHIDEMAN 1968), Acetylierung sowie die Konjugation mit Ornithin
(WOLFE & HUANG 1956) beobachtet werden.
Im Gegensatz zu konventionellen in-vitro-Systemen ist der Vogelembryo in der
Lage, Fremdstoffe zu detoxifizieren und sie in den Allantoissack auszuscheiden,
wo die Produkte der Niere akkumulieren (ROMANOFF 1960).
2.1.4 Das embryonale Blut im Micronucleustest
Das periphere Blut von Hühnerembryonen enthält bis zum Schlupf fast
ausschließlich Erythrocyten und Thrombocyten.
Andere Zelltypen wie Leucocyten kommen allenfalls sporadisch vor (LUCAS &
JAMROZ 1961; LEMEZ 1964). Ihre Bildung setzt an d4 in der Area vasculosa ein,
(ROMANOFF 1960) doch werden sie bis zum Schlupf in den hämatopoietischen
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