Lebenslauf - OPUS - Universität Würzburg

3. Material und Methode 31
Außerdem sollte die Morphologie und das Wachstumsverhalten von humanen Osteo-
blasten auf den verschiedenen Oberflächen mittels REM-Aufnahmen dargestellt und
beurteilt werden. Dafür wurden die Zellen nach 4-tägigem Wachstum auf den Ober-
flächen durch die nachfolgend beschriebenen Arbeitsschritte fixiert und für die elek-
tronenmikroskopischen Aufnahmen vorbereitet.
3.2.8.2 Fixierung und Entwässerung der Präparate
Zuerst wurden die mit Osteoblasten bewachsenen Prüfkörper in eine große PBS-
gefüllte Petrischale überführt und die Schale sofort auf Eis gestellt. Die Prüfkörper
wurden danach viermal mit 15 ml PBS-Puffer gewaschen und anschließend bei 4 °C
mit 10 ml 6%igem Glutaraldehyd überschichtet. Die Herstellung des 6%igen Glutar-
aldehyd erfolgte durch Zugabe von 7,6 ml PBS-Puffer zu 2,4 ml 25%igem Glutaral-
dehyd.
Nach der Fixierung der Präparate wurden die Prüfkörper, wie in der folgenden Tabel-
le dargestellt, gewaschen und entwässert.
MEDIUM DAUER TEMPERATUR
PBS 5 min 4°C
PBS 5 min 4°C
PBS 5 min 4°C
PBS 5 min 4°C
PBS 5 min 4°C
30% Aceton 15 min Raumtemperatur
50% Aceton 20 min Raumtemperatur
75% Aceton 30 min Raumtemperatur
90% Aceton 45 min Raumtemperatur
100% Aceton 30 min Raumtemperatur
100% Aceton 30 min Raumtemperatur
100% Aceton 30 min Raumtemperatur
100% Aceton 30 min Raumtemperatur
100% Aceton 30 min Raumtemperatur
100% Aceton Aufbewahrung zur
Weiterverarbeitung
Raumtemperatur
Tabelle 3.4: Entwässerungsreihe für REM-Aufnahmen