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Material und Methoden 18 Widerstand im abzweigenden Schenkel verhinderten die Übertragung von Druckspitzen in das Gefäßsystem der Ratte. Das Perfusat, das aus den eröffneten Gefäßen des Tieres in die Perfusionskammer floss, wurde durch zwei Schläuche in das Perfusatgefäß zurückgepumpt. Alle Schläuche waren über Metallstücke geerdet. Zudem befand sich die komplette Perfusionsanlage (außer der Pumpe, dem Perfusat und dem Heizelement) in einem geerdeten Metallkäfig, um elektrische Störsignale weitestgehend abzuschirmen. Abbildung 2-1 zeigt einen schematischen Aufbau der Perfusionsanlage. Abb. 2-1: Versuchsaufbau „Working heart-brainstem preparation of the rat“, aus Potts et al. 2000. Perfusion Die Perfusionslösung bestand aus aCSF, Ficoll (langkettige Kohlenhydrate zur Aufrechterhaltung des onkotischen Druckes) und einem Muskelrelaxans. Im Versuch wurde ein Volumen von 300 ml - wie in Abb. 2-1 gezeigt - rezykliert, sofern keine Substanzen ausgewaschen werden sollten. In Anlehnung an die Ionenkonzentrationen im Liquor zerebrospinalis wurde die künstliche Perfusionslösung aus folgenden Substanzen hergestellt:
Material und Methoden 19 Zusammensetzung aCSF: 1,25 mM MgSO4 1,25 mM KH2PO4 5 mM KCl 125 mM NaCl 2,5 mM CaCl2 25 mM NaHCO3 10 mM D-Glukose gelöst in Aqua bidest und begast mit Carbogen (5% CO2, 95% O2), pH 7,35. (Alle Komponenten wurden von den Firmen Sigma und Merck bezogen.) Ficoll wurde der Lösung erst unmittelbar vor Versuchsbeginn in einer Konzentration von 1,17 g/100 ml zugesetzt. Der osmotische Druck der aCSF lag <strong>bei</strong> 298±5 msomol l -1 . Als Muskelrelaxans wurde Vecuroniumbromid (Norcuron, Organon, Niederlande) eingesetzt, da es eine geringe Verteilungshalbwertszeit hat (2,2 Minuten) und im klinischen Dosisbereich keine kardiovaskulären Nebenwirkungen auftreten (Gebrauchsinformation und Fachinformation von Organon, Niederlande). Als Erhaltungsdosis wurden 0,02 mg Vecuroniumbromid pro kg Körpergewicht eingesetzt (die Perfusionsmenge wurde dem Körpergewicht gleichgesetzt). Die Zugabe von Norcuron erfolgte nach den ersten Thoraxkontraktionen, die die Rückkehr der respiratorischen Aktivität anzeigten. Die ersten 300 ml des Perfusats wurden nach etwa 30 min verworfen, um das Inhalationsnarkotikum sowie den größten Teil des Hämoglobins auszuwaschen. Hämoglobin-haltiges Perfusat schäumt stark, was die Konzentration der zu testenden Substanzen beeinflusst hätte. Einer Kontamination der Perfusionsanlage wurde wie folgt vorgebeugt: Nach jedem Versuch wurden Schläuche und Kammer nacheinander mit je ca. 150 ml kaltem Aqua bidest, ca. 200 ml Isopropanol und ca. 200 ml heissem Aqua bidest gespült. Wöchentlich wurde zusätzlich eine Reinigung mit 200 ml 5%igem H2O2 zwischen der Durchströmung mit Isopropanol und heissem Aqua bidest durchgeführt.
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