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Material und Methoden 20
Auf antibiotische Zusätze wurde bewusst verzichtet, um eine Beeinflussung der
Atmung durch diese Medikamente ausschliessen zu können. Zwischen den
Versuchen wurde die Anlage mit steriler Luft getrocknet und konstant durchströmt,
um Kontaminationen zu verhindern.
Begasung des Perfusats
Zu Beginn des Versuches wurde der pH-Wert des Perfusats nochmals mit
1 mM NaHCO3 auf einen pH-Wert von 7,35 ± 0,02 justiert. Falls die Phrenicus-
Aktivität bei diesem pH-Wert nicht einsetzte, wurde das Perfusat durch zusätzliche
Begasung mit einem 12%igen CO2 in O2-Gasgemisch so weit angesäuert, dass
eine regelmäßige und stabile Atemtätigkeit auftrat. Die so eingestellten pH-Werte
lagen im Allgemeinen im Bereich von 7,1 – 7,2.
Das experimentelle Protokoll
Um die Vergleichbarkeit der Ergebnisse weitgehend sicherzustellen, wurde mit
folgendem experimentellen Standardprotokoll gearbeitet (siehe auch Abb. 2-2):
Nach der Einstellung eines für die jeweilige WHBP optimalen pH-Wertes wurde
zunächst die Reaktion auf Hyperkapnie getestet, indem für 10 Minuten die CO2-
Begasung des Perfusats soweit erhöht wurde, dass ein um 0,1 pH-Einheiten
erniedrigter pH-Wert im aCSF resultierte (hyperkapnische Azidose). Etwa 15
Minuten nach Ende dieses ersten Hyperkapnie-Reizes wurde die zu testende
Substanz in das Perfusatgefäß gegeben und die Phrenicus- und Brachialis-
Aktivität weiter aufgezeichnet.
Fünfzig Minuten nach Beginn der Substanzapplikation erfolgte ein erneuter
Hyperkapnie-Reiz für 10 min. Nach Erreichen des Ausgangs-pH-Werts wurde die
Substanz ausgewaschen. Dazu wurden die ersten 300 ml, die aus der Präparation
zurückgeführt wurden, verworfen. Nach 25-minütigem „Wash“ erfolgte eine
erneute Messung der Reaktion auf hyperkapnisches Perfusat (Abb. 2-2).
Analysen der Phrenicus-Parameter (s.u.) wurden zu festgelegten Zeitpunkten ( C0,
C10 , etc.) durchgeführt.