Lehrstuhl für Mikrobiologie - Helmholtz Zentrum München
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MATERIAL UND METHODEN<br />
dann auf LB-Medium vereinzelt. Zur Anzucht von Salmonellen in Flüssigkulturen wurde<br />
ebenfalls je eine Kolonie in 5 ml LB-Medium überführt.<br />
Alle Organismen in Flüssigkultur wurden während der logarithmischen Wachstumsphase<br />
(OD600 0,4-1,0) geerntet (2 ml ERG bei 14.000 x g, 4°C, Bachhofer, Reutlingen, BRD,<br />
größere Volumina bei 5.000 rpm, 4°C, Sorvall � RC-3B und Sorvall � RC-5B refrigerated<br />
centrifuges, Du Pont Instruments, Bad Nauheim, BRD) und 1-2 mal mit 1 x PBS [B.1.1.]<br />
gewaschen.<br />
B.1.3.6.: Antibiotika<br />
Für die Anzucht plasmidhaltiger E. coli Stämme unter Selektionsdruck wurde Ampicillin in<br />
einer Endkonzentration von 100 µg/ml als Hemmstoff verwendet. Das in Pulverform<br />
bezogene Natrium-Salz des Ampicillins wurde bei 4°C, die Ampicillinstammlösung (100<br />
mg/ml [1:1 H2Oreinst:EtOHabs]) bei -20°C gelagert. Plasmidhaltige Listeria Stämme wurden<br />
mit Tetracyclin als Selektionsagens angezogen. Das Antibiotikum wurde in einer<br />
Endkonzentration von 7,5 µg/ml im Medium verwendet. Das pulverförmige Tetracyclin<br />
wurde bei 4°C, die Tetracyclinstammlösung (7,5 mg/ml [1:1 H2Oreinst:EtOHabs]) bei –20°C<br />
gelagert. Die Hemmstofflösungen wurden dem jeweiligen Medium nach dem Autoklavieren<br />
unter sterilen Bedingungen bei einer Temperatur von etwa 50°C zugegeben. Mit Antibiotikum<br />
versehene, verfestigte Medien wurden bei 4°C gelagert und bis 3 Wochen nach der<br />
Medienbereitung verwendet. Flüssigmedien wurden jeweils frisch aseptisch mit der<br />
jeweiligen Hemmstofflösung versetzt.<br />
Tabelle B.3.: Verwendete Antibiotika und Hemmstoffe<br />
ANTIBIOTIKUM/<br />
HEMMSTOFF<br />
WIRKUNGSWEISE LÖSUNGSMITTEL<br />
Ampicillin Hemmung der Mureinbiosynthese EtOH50 %<br />
Cefotetan β-Lactam Antibiotikum, Cephalosporine EtOH70 %<br />
Ceftazidim β-Lactam Antibiotikum, Cephalosporine H2Oreinst<br />
Colistinsulfat Polypeptidantibiotikum gegen gramnegative Keime EtOH70 %<br />
Cycloheximid Hemmung der Proteinbiosynthese bei Eucaryoten EtOH70 %<br />
Fosfomycin Inhibitor der Zellwandbiosynthese EtOH70 %<br />
Nalidixinsäure Hemmung der DNA Synthese (DNS Gyrase Hemmer) EtOH50 %<br />
Polymyxin-B Porenbildner in der Zellmembran H2Oreinst<br />
Tetracyclin Hemmung der Proteinbiosynthese EtOH50 %<br />
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