Lehrstuhl für Mikrobiologie - Helmholtz Zentrum München

B.1.16.1.: Ermittlung von Hybridisierungs- und Waschbedingungen____________________ 45
B.1.16.2.: Hybridisierung ganzer Zellen auf Objektträgern ___________________________ 46
B.1.16.3.: Vorbehandlung der Zellen ____________________________________________ 47
B.1.16.4.: Hybridisierung mit Fluoreszenzfarbstoff-markierten Oligonukleotid-sonden _____ 47
B.1.16.5.: Hybridisierung mit mehrfach DIG-markierten Polyribonukleotidsonden ________ 49
B.1.17.: Mikroskopische Techniken ________________________________________ 50
B.1.17.1.: Detektion fluoreszenzmarkierter Zellen durch Epifluoreszenzmikroskopie_______ 50
B.1.17.2.: Konfokale Laserscanning-Mikroskopie __________________________________ 51
B.2.: ZELLBIOLOGISCHE METHODEN ________________________________________ 52
B.2.1.: Verwendete Zelllinien _____________________________________________ 52
B.2.2.: Verwendete Lösungen, Medien und Kulturgefäße________________________ 52
B.2.3.: Hitzeinaktivierung von fötalem Kälberserum (FCS) ______________________ 53
B.2.4.: Auftauen von eingefrorenen Zellkulturen ______________________________ 53
B.2.5.: Trypsinisieren und Passagieren von Zellkulturen (Freshney et. al., 1987) _____ 54
B.2.6.: Herstellung von „Infektionsaliquots“__________________________________ 54
B.2.7.: Infektion von Zelllinien mit nativen L. monocytogenes Stämmen____________ 54
B.2.8.: Infektion von Zellen mit GFP-markierten L. monocytogenes Zellen__________ 55
B.2.9.: Adhäsionstests ___________________________________________________ 56
B.2.10.: Infektion von Zellkulturen mit GFP-markierten L. monocytogenes Stämmen und
mikroskopische Auswertung ______________________________________________ 56
C.: ERGEBNISSE ________________________________________ 59
C.1.: ANREICHERUNG UND ISOLIERUNG VON LISTERIEN UND SALMONELLEN AUS
UMWELTPROBEN_________________________________________________________ 59
C.1.1.: Isolierung von Listerien aus Umweltproben ____________________________ 59
C.1.2.: Isolierung von Salmonellen aus Bioabfallvergärungsanlagen _______________ 60
C.2.: IN SITU DETEKTION VON LISTERIEN, SALMONELLEN UND CAMPYLOBACTER _____ 64
C.2.1.: In situ Detektion von Listerien_______________________________________ 64
C.2.1.1.: Verwendete Sonden und deren Spezifität zur Detektion von Listerien ___________ 64
C.2.1.2.: In situ Detektion von Listerien mit Polyribonukleotidsonden. __________________ 66
C.2.1.3.: In situ Detektion von Listerien in Rohmilch nach Selektivanreicherung __________ 67
C.2.2.: In situ Detektion von Salmonellen ____________________________________ 69
C.2.2.1.: Verwendete Sonden und deren Spezifität zur Detektion von Salmonellen ________ 69
C.2.2.2.: In situ Detektion von Salmonellen in Bioabfallvergärungsanlagen ______________ 71
C.2.2.3.: Bestimmung des Detektionslimits des Salmonellennachweises durch FISH _______ 71
III