Lehrstuhl für Mikrobiologie - Helmholtz Zentrum München
Lehrstuhl für Mikrobiologie - Helmholtz Zentrum München
Lehrstuhl für Mikrobiologie - Helmholtz Zentrum München
Sie wollen auch ein ePaper? Erhöhen Sie die Reichweite Ihrer Titel.
YUMPU macht aus Druck-PDFs automatisch weboptimierte ePaper, die Google liebt.
MATERIAL UND METHODEN<br />
Primäre Denaturierung 94°C 1 min<br />
45 Zyklen<br />
Denaturierung 94°C 30 s<br />
Annealing 39°C 60 s<br />
Elongation 72°C 2 min<br />
Abschließende Elongation 72°C 10 min<br />
B.1.10.4.: Standardansatz und Reaktionsprogramm <strong>für</strong> die Durchführung der PCR<br />
B.1.10.4.1.: PCR in Glaskapillaren<br />
Für die spezifische Amplifizierung von DNS wurde in der vorliegenden Arbeit unter anderem<br />
die sogenannte Kapillar-PCR-Technik (Rapid Cycler Idaho Technologies, Idaho Falls, USA)<br />
eingesetzt. Alle Reagentien und Glaskapillaren außer Primer und DNS-Polymerasen wurden<br />
von der Betreiberfirma bezogen.<br />
Standardansatz <strong>für</strong> eine Reaktion:<br />
10 x BSA 5,0 µl<br />
10 x MgCl2 (20 mM) 5,0 µl<br />
10 x Nukleotidmix (200µmol „each“) 5,0 µl<br />
15 pmol PV<br />
1,0 µl<br />
15 pmol PR<br />
1,0 µl<br />
ad H2Oreinst<br />
33<br />
50 µl<br />
Polymerase 0,3 µl<br />
DNS 100 ng<br />
Der Reaktionsansatz wurde auf Eis in ein 1,5 ml ERG pipettiert und anschließend in eine 50<br />
µl Glaskapillare überführt. Nach thermischer Versiegelung der Enden wurde die Kapillare in<br />
die Halterung des Thermocyclers eingesetzt. Nach Beendigung der Reaktion wurden die<br />
Glaskapillaren mit einem Glasschneider geöffnet und der Inhalt in ein 1, 5 ml ERG überführt.<br />
Ein Aliquot von 5 µl wurde daraufhin durch horizontale Gelelektrophorese überprüft.
Change language