(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel
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[0329]<br />
[0330]<br />
[0331]<br />
폐렴 연쇄상 구균 (Streptococcus pneumoniae) 검정<br />
깨끗한 U-바텀 96 웰 마이크로타이터 플레이트를 사용하여, 항균성 검정을 행하였다. 양이온으로 조절된 뮬러-<br />
힌톤 배지 (MHB)를 폐렴 연쇄상 구균을 테스트하는데 사용하였다. 이중 실험으로, 본 발명의 펩티드 (각 0.1<br />
ml - 10 ㎍/ml)를 웰에 분배하였다. 그 다음에, 웰에 5 × 10 5<br />
CFU/mL 폐렴 연쇄상 구균을 0.1 ml 용적으로 접<br />
종시켰다. 대조군용으로, 각 플레이트는 세균 접종원을 함유하지 않는 배지를 갖는 4개의 웰 및 접종원을 함유<br />
하나, 펩티드를 함유하지 않는 배지를 갖는 4개의 웰을 포함하였다. 플레이트를 37℃에서 <strong>12</strong> 시간 동안 배양하<br />
여, 배양 후 18 내지 24 시간 동안 육안으로 리딩하였다. 처음에 폐렴 연쇄상 구균의 성장 조절을 조사하여,<br />
배지 준비물 및 성장 조건의 적합성을 결정하였다. 허용 성장은 각 샘플 웰의 저부에서 세포의 ≥ 2 mm 폭 버<br />
턴 또는 배양 상청액의 명백한 탁도로서 정의된다. 테스트 웰을 조사하여, 활성에 대하여 포지티브/네가티브<br />
스코어를 결정하였다. 활성에 대한 포지티브 스코어는 테스트 폐렴 연쇄상 구균의 거시적 성장의 완전 저해를<br />
기초로 한다.<br />
폐렴 연쇄상 구균 검정 결과:<br />
표 9<br />
[0332] 화합물<br />
저해율 %<br />
아세틸-GRP (20-26) 0.0<br />
[0333]<br />
[0334]<br />
[0335]<br />
[0336]<br />
실시예 7:<br />
결핵균 (Mycobacterium tuberculosis) 검정<br />
깨끗한 U-바텀 96 웰 마이크로타이터 플레이트를 사용하여, 항균성 검정을 행하였다. 미들브룩 (Middlebrook)<br />
7H<strong>12</strong> 애세이 배지를 약제 내성 결핵균을 테스트하는데 사용하였다. 이중 실험으로, 본 발명의 펩티드 (각 0.1<br />
ml - 10 ㎍/ml)를 웰에 분배하였다. 그 다음에, 웰에 5 × 10 5<br />
CFU/mL 결핵균을 0.1 ml 용적으로 접종시켰다.<br />
대조군용으로, 각 플레이트는 세균 접종원을 함유하지 않는 배지를 갖는 4개의 웰 및 접종원을 함유하나, 펩티<br />
드를 함유하지 않는 배지를 갖는 4개의 웰을 포함하였다. 플레이트를 37℃에서 7일간 배양하여, 그 후에 육안<br />
으로 리딩하였다. 처음에 결핵균의 성장 조절을 조사하여, 배지 준비물 및 성장 조건의 적합성을 결정하였다.<br />
허용 성장은 각 샘플 웰의 저부에서 세포의 ≥ 2 mm 폭 버턴 또는 배양 상청액의 명백한 탁도로서 정의된다.<br />
테스트 웰을 조사하여, 활성에 대하여 포지티브/네가티브 스코어를 결정하였다. 활성에 대한 포지티브 스코어<br />
는 테스트 결핵균의 거시적 성장의 완전 저해를 기초로 한다. 검정에 사용된 약제 내성 결핵균은 하기 약제에<br />
대한 내성을 나타낸다: 파라-아미노살리실산 (PAS), 스트렙토마이신 및 이소니아지드 (INH).<br />
결핵균 검정 결과:<br />
표 10<br />
[0337] 화합물<br />
저해율 %<br />
아세틸-GRP (20-26) 0.0<br />
[0338]<br />
[0339]<br />
[0340]<br />
실시예 8:<br />
세포 주기 분석<br />
공개특허 10-2010-0056515<br />
인간 A549 세포 (인간 폐포암 기저 상피 세포 (carcinomic human alveolar basal epithelial cell))를 요오드<br />
화프로피듐 (Propidium iodide) 세포 주기 검정 실험에 사용하였다. 진핵 세포 주기는 세포에서 이의 복제에<br />
이르기 위해 일어나는 일련의 이벤트이다. 세포 주기 조절은 유전자 손상 검출 및 복구, 및 제어되지 않은 세<br />
포 분열을 방지하는 각종 체크의 공급을 포함한, 세포에 매우 중요한 단계를 포함한다. 세포 주기를 제어하는<br />
분자 이벤트는 정해져 있고 방향성을 나타내며; 즉, 각 프로세스는 순차적으로 일어난다. 세포 주기는 4개의<br />
상이한 기: G1 기, S 기, G2 기 (일괄하여, 간기로서 알려짐) 및 M 기로 구성된다. M 기는 그 자체가 2개의 밀<br />
접하게 연관된 프로세스: 세포 염색체가 2개의 딸세포 사이에 분배되는 유사 분열, 및 세포질이 분할하여 상이<br />
한 세포를 형성하는 세포질 분열로 구성된다. 각 기의 활성화는 적절한 진행 및 이전 기의 완료에 의존한다.<br />
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