(19) 대한민국특허청(KR) (12) 공개특허공보(A) - Questel

[0367]
시스를 매개한다. C2 세라마이드는 세라마이드의 막 가용성 합성 유사체이다.
아폽토시스 예방 검정 결과:
표 16
[0368] 화합물
세라마이드로 유도된 아폽토시스
[0369]
[0370]
[0371]
[0372]
실시예 14:
Th1/Th2 사이토카인 프로파일링 검정
예방률 %
아세틸-GRP (20-26) 0.0
Balb/c 마우스 (1923년에 유래된 일반적인 균주로, 다수의 상이한 리서치 분야에 사용됨. 또한 20회 이상의 상
이한 연속 형매 교배 (brother-sister mating) 생산에 의한 동종 교배로서 분류됨, Balb/c 마우스는 알비노로
사이즈가 작음)를 PBS (5 ㎍/인젝션) 중의 오발부민 (오발부민은 통상 테스트 동물의 면역 반응을 자극시키는데
사용되는, 난백에서 발견되는 주요 단백질임)으로 1, 15, 및 29일째에 면역화시켰다. 50일째에, 마우스의 비장
을 채취하였다 (오발부민으로 최후 부스트 (boost) 3주 후에). 세포를 배양하여 (2 × 10 5
/웰, 삼중 실험), 배
지 또는 테스트 펩티드 - 10 ㎍/ml로 30분간 배양하였다. 그 후에, 추가의 오발부민을 세포의 시험관 내에서의
재자극을 위해 10 ㎍/ml으로 세포에 가하였다. 72 시간 후에, 세포 상청액을 채취하여, 벡톤 디킨슨 (Becton
Dickinson) 마우스 Th1/Th2 사이토카인 CBA 키트를 이용하여 검정하였다. 이 키트는 단일 샘플 중의 인터루킨-
2 (IL-2), 인터루킨-4 (IL-4), 인터루킨-5 (IL-5), 인터페론-γ (IFN-γ), 및 종양괴사인자-α (TNF-α) 단백
질 레벨을 측정하는데 사용될 수 있다. 키트 성능은 조직 배양 상청액 및 혈청 샘플 중의 특이적 사이토카인
단백질의 생리적으로 상응하는 농도 (pg/ml 레벨)의 분석에 최적화되어 있다.
Th1/Th2 사이토카인 검정 결과:
[0373] 화합물 TNF-α 비장
세포;
[0374]
[0375]
[0376]
[0377]
실시예 15:
아세틸-GRP
(20-26)
TNF 알파 생성 검정
IFNγ 비장
표 17
IL-2 비장
IL-4 비장
세포;
IL-5 비장
세포;
세포
세포;
TH1 반응 TH1 반응 (대조군에 TH2 반응 TH2 반응
(대조군에 대
한 %)
(대조군에
대한 %)
대한 %) (대조군에 대한 (대조군에
%)
대한 %)
145.8 117.9 202.7 168.7 102.5
인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 정상 인간 공여자로부터 얻었다. 플레이트의 플라스틱 웰에 PBMC을 부착시
켜, 대식세포를 준비하였다. 2 ng/ml의 재조합 인간 대식세포-콜로니 자극인자의 존재하에 8일 배양한 후, 분
화된 대식세포를 테스트 펩티드 - 10 ㎍/ml와 함께 30분간 전배양한 다음에, 200 ng/ml의 최종 농도로 리포폴리
사카라이드를 첨가하여, 인웰 자극 (in-well stimulation)을 유도하였다. 자극되지 않은 대식세포를 음성 백그
라운드 대조군으로서 사용하였다. 하룻밤 동안의 배양 후에, 대조군 및 LPS로 자극된 배양물의 상청액을 채취
하여, TNF 알파 특이적 ELISA를 이용하여 TNF 알파 생성을 검정하였다.
TNF 알파 검정 결과:
표 18
[0378] 화합물
LPS 유도율 %
아세틸-GRP
(20-26)
102.4
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공개특허 10-2010-0056515