MICROBIOLOGIA GENERAL Guia de Trabajos Prácticos

2. Coloración de esporas. Técnica Schaeffer-Fulton.Esta técnica permite distinguir las esporas del cuerpo vegetativo del microorganismo y determinar sulocalización y forma.Desarrollo:1) Preparar el extendido del microorganismo y fijar por calor.2) Cubrir todo el porta con solución de verde de Malaquita al 5% en agua.3) Calentar a la llama hasta que emita vapores y seguir el calentamiento durante 3 minutos SINPERMITIR QUE SE SEQUE EL COLORANTE. Si esto ocurriera agregar mas sobre el preexistente y nosobre la parte seca, hasta cubrirlo nuevamente.4) Lavar con agua y cubrir con solución de SAFRANINA, dejar actuar 30 segundos. Lavar con agua ,secar y observar al objetivo de inmersión6) INFORMAR: morfologia, color y tipo de espora.CUESTIONARIO T.P. 21) Describa en detalle la composición y estructura del peptidoglicano, pared Gram (+) y pared Gram (-).2) En la coloración de Gram, cuál es el colorante de Gram y cuál el de contraste? Qué es el mordiente?3) Usted debe realizar coloración de gram para una serie de especímenes. Comienza a realizar lacoloración y en el último paso se da cuenta de que le falta la solución de safranina. Decide de todosmodos no perder mas tiempo y observa los preparados al microscopio. Puede dar con certeza un informedistinguiendo cuáles especímenes son Gram (-) y cuáles Gram (+)?4) Qué clase de imágenes proveen y con qué propósitos suelen ser usados los microscópios de campoclaro, de campo oscuro, de contraste de fase, de epifluorescencia, electrónicos de transmisión yelectrónicos de barrido?5) Por qué en la tinción de endosporas por el método de Schaeffer-Fulton el colorante verde de malaquitano se pierde en el paso de lavado?6) ¿ Podría utilizar un colorante básico como primer colorante en la tinción de esporas ?.7) ¿ Por qué no se tiñen las células alcohol -ácido resistentes por la coloración de Gram?.8) ¿ Qué características debe tener un colorante para ser empleado en una tinción negativa?.9) Las tinciones de Gram, esporas y Ziehl Neelsen permiten determinar diferencias estructurales encélulas de distintos géneros. ¿Cuáles son esas diferencias y cuál es el paso de cada coloración que laspone en evidencia ?. ¿ Qué tipos de colorantes se utilizan en cada caso ?.10) Bacillus subtilis presenta color violeta al microscopio óptico luego de una tinción de Gram y colorrosado al efectuarse una coloración de esporas. ¿ Por qué motivo el cristal violeta en el primer caso y lasafranina en el segundo tiñen la bacteria de esa manera ?.10) Indique cual o cuales de las tinciones realizadas en los trabajos prácticos ponen en evidenciadiferencias estructurales de la pared bacteriana. Explique brevemente.