MICROBIOLOGIA GENERAL Guia de Trabajos Prácticos

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Aislamiento de Staphylococcus aureus1-Agregrar 10 g de ricota a un erlenmeyer con agua peptonada estéril. (1/1000 peptona de caseina enagua destilada)2-Agitar e incubar 2 h a temperatura ambiente.3-Mezclar caldo cerebro-corazon con 13% de NaCl con el agua peptonada con ricota en partesiguales.4-Incubar 48h a 37ºC.5-Si hay crecimiento, tomar una muestra con ansa y estriar enagar manitol salado y agar azida.6-Incubar 48 h a 37ºC.5-Observar crecimiento.Aislamiento de Pseudomonas aeruginosa1-Sembrar 0,5 ml-1ml de agua en caldo M9 (2X)2-Incubar 48 h a 42 grados.3-Si hay crecimiento (turbidez) tomar muestra con el ansa y estriar sobre agar cetrimida.4-Incubar 48 h a 37 grados.5-Observar crecimiento de colonias con pigmento verde.Aislamiento de Bacillus cereus y Bacillus subtilis1-Agregar 10 g de arroz a 50ml de PBS esteril2- Agitar durante 10 min.3- Calentar a 80 C durante 5 min.4- Tomar 1ml de sobrenadante y pasarlo a caldo nutritivo.5-Incubar 48 h a 37ºC.6-Estriar en agar Mossel con emulsión de yema de huevo (selectivo y diferencial).7-Incubar 48 h a 37 ºC.8-Observar el crecimiento de colonias con halo rosa-púrpura con precipitado blanco espeso (cereusmanitol-,lecitinasa +) y colonias con halo amarillo (subtilis, manitol +,lecitinasa -).Aislamiento de Lactobacillus spp.1-Realizar diluciones seriadas de yogurt en Sn fisiologica estéril y sembrar 0,1ml de cada una en agarMRS.2-Incubar 48h a 37ºC en microaerobiosis3-Calcular el recuento de bacterias viables lácticas y observar los distintos fenotipos de coloniascrecidos en agar MRS 2.4-Seleccionar 2 fenotipos distintos y estriarlos en agar Rogosa.5-Incubar en condiciones de microaerobiosis a 37ºC.Aislamiento de Azotobacter y otras fijadoras de nitrogeno atmosferico.1-Agregar 10 g de tierra a 10 ml de agua esteril2-Agitar y dejar decantar3-Inocular 2 ml a caldo Fred y Waksman4-Incubar 48 h a 28ºC con agitacion5-Si hay crecimiento tomar una muestra con ansa y estriar agar Fred y Waksman
Medios a utilizar:CALDO NUTRITIVOExtracto de Carne 3,0 gPeptona de Carne 5,0 gAgua destilada c.s.p. 1 lpH= 7,0±0,2Para el AGAR NUTRITIVOagregar 15 g de AgarCALDO MAC CONKEYPeptona de Caseína 20,0 gLactosa10,0 gBilis de Buey desecada 5,0 gPúrpura de Bromocresol 0,01 gAgua destilada c.s.p. 1lpH= 7,4±0,2AGAR-AZIDA:Brain Heart InfusionAzida sodicaAgarAgua c.s.p.37 g0,3 g15 g1 lAGAR MAC CONKEYPeptona de Caseína 17,0 gPeptona de Carne 3,0 gCloruro de Sodio 5,0 gLactosa10,0 gSales biliares1,5 gRojo neutro0,03 gCristal violeta 0,001 gAgar13,5 gAgua c.s.p.1 lpH= 7,1±0,1CALDO CEREBRO-CORAZONInfusión de cerebro12,5 gInfusión de corazón5,0 gProteosa Peptona10,0 gD(+) Glucosa2,0 gNaCl5,0 gDi- Sodio hidrogenofosfato 2,5 gAgua c.s.p. 1 lCALDO TIOGLICOLATOPeptona de CaseínaExtracto de LevaduraL(+) CisteinaD(+) GlucosaNaClTioglicolato de SodioResarzurina sódicaAgua c.s.p.15,0 g5,0 g0,5 g5,5 g2,5 g0,5 g0,001 g1 lCALDO M9 2XNH 4 Cl1,0 gNa 2 HPO 46,0 gK 2 HPO 43,0 gNaCl0,5 gGlicerol o Asparragina 5,0 gAgua c.s.p.1lSulfato de Magnesio 1M 1mlCloruro de Calcio 0,01 M 10ml(AUTOCLAVAR APARTE)CALDO MRS (de Mann, Rogosa y Sharpe)Peptona Universal10,0 gExtracto de Carne5,0 gExtracto de Levadura5,0 gD(+) Glucosa20,0 gDi-potasio hidrogenofosfato2,0 gTween 801,0 gDi amonio hidrogenocitrato2,0 gAcetato de sodio5,0 gSulfato de Magnesio0,1 gSulfato de Manganeso0,05 gAgua c.s.p.1 lAGAR CETRIMIDA:Peptona de GelatinaMgCl 2CetrimidaglicerinaSO4K2AgarAgua c.s.p.20 g1,4 g0,3 g10 ml10 g13,6 g1 lCALDO LB (Luria, Bertani)Triptona10,0 gExtracto de Levadura5,0 gNaCl10,0 gAgua c.s.p.1 lPara el AGAR LB agregar 12 g de AGAR.
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