MICROBIOLOGIA GENERAL Guia de Trabajos Prácticos

Resultado positivo: formación de burbujas debido a laproducción de O 2 a partir del H 2 O 2 por acción dela enzima.3) Prueba del agar hierro-dos azucares de KliglerPermite determinar la capacidad de un microorganismo de metabolizar un hidrato de carbono especificoincorporado a un medio de crecimiento básico asi como la produccion de gas y acido sulfhidrico.Se suele utilizar para la identificacion de distintas especies de la familia Enterobacteriaceae.Metodología:1- Inocular cada uno de los microorganismos aislados por puncion y por estría en el mismo tubo deagar hierro de Kligler.2- Incubar a 37ºC durante 18-24 h3- Observar entre las 18 h y las 24 h de cultivo (ni antes ni despues)Resultados:El uso de un hidrato de carbono implica la liberacion al medio de productos acidos capaces de serdetectados por un indicador de pH. Si el microorganismo en cuestion es incapaz de usar el H de C,consume entonces las peptonas del medio liberando productos que alcalinizan el mismo. Al interpretarlosd datos de la prueba debe tenerse en cuenta los siguientes aspectos:A)Utilizacion del hidrato de carbono:*Si el microorganismo en estudio solo fermenta glucosai) en superficie:reaccion alcalina, color rojoii) en profundidad: reaccion acida, color amarillo*Si el microorganismo es capaz de fermentar tanto glucosa como lactosa:i) en superficie: reaccion acida, color amarilloii) en profuindidad: reaccion acida, color amarillo*Si el microorganismo no es capaz de fermentar glucosa ni lactosa (no enterico)i) en superficie: reaccion alcalina, color rojoii) en profundidad: si es aerobio entonces no hay crecimiento ni cambio de color; si esfacultativo entonces hay reaccion alcalina y color rojo* Si el microorganismo no es capaz de fermentar lactosa pero si de oxidarlai) en superficie: reaccion acida en tiempos cortos (color amarillo) luego reaccionalcalina y color rojo.ii) en profundidad: no hay crecimiento ni cambio de color.B) Produccion de gas• Si el microorganismo en estudio es aerogenico, la produccion de H 2 y CO 2se manifiestan por la formacion de burbujas y/o el desprendimiento de delagar del fondo del tubo, dejando un area clara• Si el microorganismo en anaerogenico, entonces no hay liberacion de gases2• Si el microorganismo produce este acido, el mismo reaccionara con el hierroformando un precipitado de SFe insoluble (color negro)• Si no produce el acido no habra reaccion