MICROBIOLOGIA GENERAL Guia de Trabajos Prácticos

4) Pruebas del IMViC (INDOL-ROJO METILO-Voges Proskauer-Citrato)Estas cuatro pruebas son muy utiles para distinguir bacterias coliformes entre si.Producción de INDOLMide la capacidad del microorganismo de producir indil a partir de triptofano por acción de laenzima triptofanasa.Metodología:1) Inocular tubos con agua de triptona con una ansada de cultivo puro crecido 18-24 h enagar nutritivo. Dejar un tubo sin inocular como testigo.2) Incubar a 37 por 48 h.3) Colocar sobre el tubo unas gotas de reactivo del indol de Kovacs (alcohol amílico,paradibenzaldehido acido). Dejar reposar hasta aparición de anillo rojo en superficie.prueba positiva: formación de anillo rojo en fase alcoholica (compuesto quinónico derivado delindol)prueba negativa: anillo amarillo en superficie.VOGES PROSKAUER y Rojo de MetiloEstas dos pruebas permiten detectar el tipo de fermentación (butilenglicólica o acido mixta) querealiza el microorganismo. La prueba de Voges-Proskauer sirve para comprobar la capacidad dealgunos organismos de producir acetilmetilcarbinol (acetoína) a partir de la frementaciónbutilenglicólica de la glucosa. Klebsiella pneumoniae y Enterobacter (+). Escherichia coli yotras especies de Klebsiella (-). La prueba del Rojo Metilo sirve para comprobar la capacidad deun organismo de producir y mantener estables los productos terminales acidos d elafermentación (ácido mixta) de la glucosa. Escherichia coli (+) y Klebsiella, Enterobacter (-).Metodología:1- Inocular tubos conteniendo caldo MR-VP con una ansada de cultivo frescocrecido en agar nutritivo.2- Incubar a 37 por 48 h3- Dividir el contenido del tubo en dos partes iguales4- Para determinar presencia de acetoína (Voges) agregar a 1 ml de cultivo 0.6 mlde Reactivo de Barrit y 0,2 ml de KOH al 40%.5- Agitar suavemente y dejar reposar 5-10 min.Prueba positiva: color rosado-rojo en la superficie que se intensificará al cabo de unas horas(presencia de acetoína).Prueba negativa: sin cambio de color (amarillo) en la superficie.6-Para detreminar Rojo Metilo, agregar al segundo tubo unas 5 gotas de indicador rojo de metiloal 0,1%.Prueba positiva: si el cultivo continua siendo de color rojo, entonces el pH esta por debajo de4,4. Hay fermentación ácido-mixta.Prueba negativa: color amarillo en la superficie, pH=6.