MICROBIOLOGIA GENERAL Guia de Trabajos Prácticos

TP Nº 4AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOSDIVERSIDAD METABÓLICAMedios de enriquecimiento, selectivos y diferenciales:Para aislar un microorganismo de la naturaleza se debe conocer previamente los requerimientosnutricionales del mismo y las condiciones ambientales propicias para su desarrollo.Los alumnos deberan buscar en la bibliografia las características metabólicas y el hábitat de losmicroorganismos que se van a aislar.En base a los estudios realizados sobre el metabolismo y los requerimientos nutricionales de las bacterias,se han desarrollado medios de cultivo para facilitar el trabajo en el laboratorio cuando se parte demateriales que supuestamente tendrían más de una especie bacteriana. Así tenemos medios que permiten:a) favorecer el crecimiento de un microorganismo sobre otros, es decir "enriquecerlo" con respecto a unaespecie; b) "seleccionar" el crecimiento de determinadas bacterias, inhibiendo el de otras; y c) poder"diferenciar" colorimétricamente las distintas especies bacterianas .Metodologia general de trabajo:1) Inocular la muestra (agua, tierra, alimentos) en un caldo de enriquecimiento que puede ser selectivo ono, para favorecer el crecimiento del organismo de interes2) Incubar a temperatura y tiempo adecuados3) Tomar una muestra del caldo ya crecido y estriar en medio solido selectivo con el objeto de inhibir laflora acompañante del microorganismo que se desea aislar. Este medio puede a su vez ser diferencial(diferencia a una determinada cepa o especie en base a alguna caracteristica de la colonia).4) Incubar a temperatura y tiempo adecuados.5) Observar el crecimiento de las colonias y hacer repique a agar nutritivo para realizar coloracion deGram. Posteriormente se identificaran los microorganismos en base a pruebas bioquimicas.Microorganismos a usar: Echerichia coli, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Staphylococcusaureus,Streptococcus spp. Lactobacillus spp., Pseudomonas aeruginosa, Azotobacter spp.Aislamiento de E. coli1-Tomar 10 ml de muestra de agua y sembrar caldo Mc Conkey 2X2-Incubar 48 hs a 37ºC.3-Observar crecimiento (formacion de gas en campana de Durham y viraje del indicador a amarilloindica probable presencia de E. coli).4-Tomar muestra con el ansa y estriar en agar Mac Conkey y agar EMB 5-Observar colonias conbrillo verde metalico en EMB y rojas en Mac Conkey .