Génétique de la Levure

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souche ∆x transformation avec un fragment d’ADN modifié in vitro survivants X 5’ URA3 X 3’ mut X 5’ X X 3’ étalement sur boites contenant du FOA mut X 5’ X 3’ URA3 X vérifications à faire: - introduction de la cassette au locus désiré - présence de la mutation
IV Que faire avec les gènes essentiels? • environ 1/3 des gènes sont essentiels. Leur délétion est létale. • On détermine si un gène est essentiel en réalisant la délétion dans un diploïde. Après dissection, seules deux spores seront viables et ne porteront pas le marqueur de la délétion. • Après mutagénèse aléatoire, on contourne le problème en recherchant des mutations thermo-sensible (ts) pour lesquelles le produit du gène sera fonctionnel à température permissive (25°C) et inactif à température restrictive (37°C). • l’autre possibilité consiste à transformer la souche avec un plasmide exprimant le gène sauvage de façon conditionnelle (sous contrôle d’un promoteur inductible).
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