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A. Sélection et crib<strong>la</strong>ge <strong>de</strong>s mutants<br />
– Une mutagénèse au hasard aboutit à une popu<strong>la</strong>tion<br />
hétérogène portant différents type d’allèles mutés. On veut<br />
tester chaque clone pour chercher <strong>la</strong> ou les mutations<br />
d’intérêt.<br />
– Pour ceci, on va établir <strong>de</strong>s conditions dans lesquelles <strong>la</strong><br />
mutation rechercher va donner soit un avantage <strong>de</strong> croissance<br />
(crible positif) ou être délétère (crible négatif)<br />
– premier challenge intellectuel: penser <strong>de</strong>s conditions <strong>de</strong><br />
croissance ou <strong>de</strong> souche , où seul le mutant recherché va<br />
pousser/ou ne pas pousser: un bon exemple est le crib<strong>la</strong>ge basé<br />
sur une résistance à un inhibiteur.<br />
– <strong>de</strong>uxième challenge intellectuel: penser <strong>de</strong>s conditions <strong>de</strong><br />
crib<strong>la</strong>ge qui permettent d’isoler le mutant d’intérêt tout en<br />
éliminant tout ceux qui pourraient donner le même phénotype<br />
par une voie détournée.<br />
Wild type<br />
hog1D<br />
sko1D<br />
aca1D aca2D<br />
hog1D sko1D<br />
hog1D aca1D<br />
aca2D<br />
hog1D sko1D<br />
aca1D aca2D<br />
Wild type<br />
aca2D<br />
hog1D<br />
hog1D aca2D<br />
YPD YPD + 0.4M NaCl<br />
YPD YPD + 0.4M NaCl
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