Catalogue Lycée SVT 2013-2014 - sordalab

KITS TP LYCEE
PROGRAMME TERMINALE SECONDE
MPS EXAO OBSERVATION PREPA. GEOLOGIE BIOLOGIE ORGANISMES
MICROSCOPIQUES
VIVANTS
KITS TP LYCEE
KIT TRANSGENÈSE DE LA LEVURE
2NDE
B.O :
La Terre dans l’univers, la vie et l’évolution du vivant
Objectifs cognitifs
La transgénèse montre que l’information génétique est contenue
dans la molécule d’ADN et qu’elle y est inscrite dans un langage
universel.
SANS DANGER
pas de bactéries
Ni d’antibiotiques
Conservation
Réfrigérateur : Tampons et souche
Congélateur : plasmide
La souche Ade2 est :
- Incapable de pousser sur milieu sans adénine.
- Colorée en rouge sur milieu riche (YPD2).
Ce phénotype est du à une mutation dans la voie de biosynthèse de l’adénine.
Objectifs cognitifs
Montrer que l’ADN est support d’informations génétiques
Composition du KIT
Le kit est automatiquement composé de la souche, des réactifs et du milieu
- SOUCHES :
Saccharomyces cerevisae Ade2 sur boîte de pétri
- MILIEUX et réactifs :
1 litre de milieu sélectif
100 ml de milieu riche pour le repiquage de la souche
50µl de plasmide
20 ml de tampon lithium
5ml de tampon de transformation3 tubes d’eau stérile
- OPTION (Matériel pour 40 élèves)
- 50 boîtes de pétri diamètre 90 mm
- 40 microtubes à fond conique (code couleurs)
- 5 cure-dents stériles
- 50 étaleurs stériles
- 4 poires stériles
sNotice technique et pédagogique
Préciser la date de votre
TP sur la commande
Matériel nécessaire
Centrifugeuse (3000 trs/min) RÉFÉRENCE CENTRI (page 299)
Bain-Marie (42°C) RÉFÉRENCE BMGG1 (page 297)
Prélèvement de 3µl et 100µl : Micropipettes (page 339)
Milieu avec adénine / Milieu sans adénine
Principe
Après l’introduction d’un fragment d’ADN plasmidique porteur de l’allèle sauvage du gène Ade2 dans la souche Ade2 -, celle-ci va pouvoir
pousser sur milieu sans adénine et sa coloration sur milieu sans adénine va devenir blanche.
Manipulation proposée (1h30)
Remettre en suspension une colonie de levures d’une culture fraîche (faite 2 à 3 jours au préalable) dans un tampon
au lithium en tube à fond conique, centrifuger à 3000 tours, resuspendre dans deux microtubes par le tampon
de transformation (PEG, DTT, LiAc) qui va perméabiliser la paroi et permettre la pénétration du plasmide,
mettre le plasmide dans un des deux tubes, finaliser la pénétration par un choc thermique à 42°C, centrifuger, resuspendre
le culot par de l’eau et étaler les deux tubes sur milieu sans adénine.
Manipulations optionnelles (en spécialité)
1. A partir des deux tubes étalés ci-dessus, il est possible de déterminer la fréquence de transformation (nombre
de cellules transformées/nombre de cellules totales). Pour cela, il suffit de faire un étalement après dilution de ces
deux tubes sur milieu non sélectif. Les colonies seront rouges dans les deux cas :
Dans le tube sans plasmide, on retrouve le phénotype initial. Dans celui avec plasmide la fréquence de transformation
étant faible, la grande majorité (plus de 99,99%) des levures sont sans plasmide.
2. Une autre manipulation possible est de repiquer sur milieu non sélectif les colonies blanches ayant poussé sur
milieu sélectif : elles sont blanches contrairement au phénotype avant transformation (rouge sur ce milieu).
Pour ce faire, il suffit de commander du milieu YPD2 (voir page 217)
Désignation Référence Prix TTC
Souche, réactifs et milieux en poudre TRAN/SMP 53,25 C
Souche, réactifs et milieux à couler (3 bouteilles de 340mL) TRAN/SMAC 58,60 C
Petit matériel TRAN/MAT 15;25 C
Tube sans plasmide / Tube avec plasmide
1 2
266
+33 (0)1 69 92 26 72 +33 (0)1 69 92 26 74 info@sordalab.com www.sordalab.com
15 Av. des grenots
91150 Etampes