Download - Pusat Dokumentasi dan Informasi Ilmiah UNS

59 15
faktor bahan kimia yang dibutuhkan dan alat-alat yang dipakai juga beragam
(Sudarmono, 2006).
Prinsip dasar elektroforesis yaitu bahwa setiap genom tumbuhan (enzim/
protein dan DNA) mempunyai berat molekul yang berbeda sehingga kecepatan
bergerak pada media gel juga berbeda. Hal tersebut dapat dilihat melalui
pewarnaan (Sudarmono, 2006).
Isozim dapat dipisahkan dengan metode elektroforesis pada gel pati
maupun gel poliakrilamid, hasilnya berupa zimogram pola pita yang diperoleh
setelah dilakukan pewarnaan. Zimogram hasil elektroforesis bercorak khas
sehingga dapat digunakan sebagai ciri untuk mencerminkan perbedaan genetik
(Indriani dkk., 2008).
Pelaksanaan penelitian isozim meliputi pengambilan contoh sampel,
pembuatan larutan buffer (buffer pengekstrak dan buffer elektrolit), pembuatan
gel poliakrilamid, ekstraksi enzim, elektroforesis, pembuatan larutan pewarna,
pewarnaan, pengamatan dan pembuatan zimogram, pembuatan foto pola pita
gel serta analisis pola pita isozim (Indriani dkk., 2008).
5. Gel Poliakrilamid
Gel poliakrilamid merupakan larutan dari akrilamid dan bisakrilamid.
Elektroforesis dengan menggunakan gel poliakrilamid lebih banyak digunakan
pada eksperimen analisis protein maupun campuran protein. Gel poliakrilamid
merupakan medium yang dipilih untuk elektroforesis sebagian besar protein.
Gel poliakrilamid memiliki keuntungan antara lain stabil pada kisaran pH,